|
- 실험에 대한 고찰-
1. 실험값: lowry 의 방법을 사용하여 얻었다. 단백량이 용액에 녹아 있는 양이 많을수록 시약에 있는 구리 2가 이온과 반응하여 색이 달라지면 그것의 흡광도를 측정하여 용액의 단백량을 추정하는 방법이다. 우리는 단백질을 전혀 넣지 않은 것의 흡광도를 0으로 설정하고 단계적으로 단백량을 늘려 흡광도가 그것이 비례하는 것을 관찰하고 그래프를 그렸다. 그리고 단백질의 양을 모르는 미지의 시료의 흡광도를 측정하여 그 그래프의 y 축에 해당하는 값의 x 값이 바로 미지 시료의 농도라고 생각했다. Beer’s law 에 따르면 흡광도는 통과하는 시료의 두께와 농도에 비례하기 때문이다. 그때 얻은 미지의 시료의 흡광도에 따른 단백질의 양은 2.734 μg/mL였다.
2. 원래 값: 우리가 측정한 미지시료 C 의 원래 단백질 양은 1.4 μg/mL 였다. 실험값은 원래 값의 195 % 오차를 보였다. 그리고 Western blotting 으로 양을 보았더니 A 시료와 B 시료 다음으로 두께가 보여야 했는데 우리가 실험한 C 값의 두께는 다른 조의 미지시료의 것보다 상대적으로 두꺼웠다.
3. 오차 값에 대한 고찰: 오차 값이 나타난 가장 큰 원인은 피펫팅에 있었다고 본다. 두 가지의 피펫팅의 오류가 있을 수 있다.
A…(생략)
|
분자량에 의해서 전기영동을 걸어주면 분리가 된다. 이번에 실험실에서 사용한 SDS page 는 Laemmli 의 방법을 따른 불연속 젤 전기영동이다. 이것은 두가지 젤 계 (stacking과 separation gel)을 사용한다. separation gel 은 stacking gel 보다 농도가 높은데 이것은 분자가 낮은 농도의 gel 을 통과하다가 separation gel에 부딛히면서 극히 얇은 층으로 한꺼번에 치 쌓이게 하면서 출발점을 같게 만들어 단백질이 단지 분자량에 의해 의존하여 분리되도록 한다. 단백질의 분자량에 따라 젤의 농도를 바꾸는데 보통 단백질의 분자량이 낮을수록 젤의 농도가 높은 것을 사용하게 된다. 이 때 쓰이는 젤은 폴리 아크릴 아마이드 젤이다. northern blot 을 사용하여 분리하는 RNA와 southern blot 으로 분리하는 DNA는 보통 Agar gel 로 분리한다.
인 쇄
바로가기
생화학 실험.doc
[Size :
30 Kbyte
]
장바구니
