Competent cell preparation E. coli Transformation

Competent cell preparation E. coli Transformation

1. 서론

컴페턴트 세포 준비는 유전자 재조합 실험에서 핵심적인 단계로, 형질전환 효율을 높이기 위해 매우 중요하다. 특히, Escherichia coli(이하 E. coli)는 높은 증식력과 숙주로서의 안정성을 바탕으로 널리 사용되는 박테리아이다. 컴페턴트 세포는 세포 벽을 약하게 하거나 제거하여 외부의 플라스미드 DNA가 세포 내로 유입되기 쉽게 만든 세포 상태를 의미한다. 이 과정을 통해 형질전환 효율이 최대 10^8 CFU(콜로니 형성 단위)per 마이크로그램의 플라스미드 DNA 수준까지 향상될 수 있다. E. coli의 경우, 일반적으로 사용하는 컴페턴트 세포 방법은 냉수처리(콜드 템퍼링)와 CaCl2 처리법이며, 이 두 가지는 각각의 장단점이 있다. CaCl2 처리법은 비교적 간단하고 회전수 3000rpm에서 10분간 원심분리 후, 0°C에서 일정 시간 냉처리하는 방식으로 수행된다. 이 방법은 1980년대 이후 표준화되어 많은 연구실에서 널리 채택되고 있으며, 형질전환 효율이 최대 10^6 CFU/μg DNA에 도달할 수 있다고 보고되었다. 실제로, 통계자료에 따르면 CaCl2 처리법을 이용한 E. coli 컴페턴트 준비는 평균적…