Blue-White Screening

1. transformation

Transformation은 유전자 조작에서 중요한 단계로, 특정 유전자를 세포에 도입하여 그 유전자의 발현을 유도하는 과정이다. 이 과정은 박테리아와 같은 미생물이 외부 DNA를 흡수하여 자신의 유전체에 통합하는 능력을 활용한다. 일반적으로 블루-화이트 스크리닝에서 사용되는 대장균(E. coli)과 같은 그람 음성 세균이 가장 흔히 이용된다. Transformation 과정은 다양한 방법으로 수행될 수 있지만, 가장 널리 사용되는 두 가지 방법은 화학적 방법과 전기천공법(electroporation)이다. 화학적 방법은 일반적으로 칼슘 이온을 사용하여 세포막의 투과성을 증가시키는 과정이다. 이 방법에서는 대장균을 낮은 온도의 CaCl2 용액에 처리하여 세포벽이 약화되도록 하고, 이때 외부 DNA를 세포에 추가하여 고온 처리, 즉 열 충격을 가함으로써 DNA가 세포 내로 침투하도록 유도한다. 열 충격은 세포막을 열어주어 외부 DNA가 세포로 들어가는 경로를 제공한다. 전기천공법은 전기장에 의한 방법으로, 세포가 전기장에 노출될 때 세포막에 미세한 구멍이 생기게 된다. 이 구멍을 통해 DNA가 세포의 내부로 진입할 수 있다. 이 방법은 비교적 높은 전달 효…