PCR 과 QPCR(real time PCR)

1. 기본 PCR의 이해

기본 PCR(Polymerase Chain Reaction)은 특정 DNA 서열을 선택적으로 증폭하는 기술로, 1980년대 초반 홀머스와 그의 동료들이 개발하였다. PCR의 주된 목적은 원하는 DNA 조각을 빠르고 효율적으로 증폭하여 연구나 진단에 활용할 수 있게 하는 것이다. 이 과정은 정교한 기법으로, DNA의 이중 나선을 분리하고, 이를 기반으로 서열을 복제하는 일련의 화학적 반응을 포함한다. 기본적인 PCR 과정은 세 단계로 나눌 수 있다. 첫 번째 단계는 변성 단계로, 고온에서 DNA 이중 나선이 열리면서 두 가닥이 분리되는 과정이다. 일반적으로 94도에서 98도 사이의 온도에서 20초에서 30초 정도 유지된다. 이 온도에서 DNA의 수소 결합이 끊어지면서 두 개의 단일 가닥이 생성된다. 두 번째 단계는 annealing 단계로, 이 단계에서는 온도를 낮추어 두 개의 프라이머가 목표 DNA 서열의 시작점에 결합하는 과정이다. 프라이머는 특정 서열에 맞춰 디자인되며, 보통 50도에서 65도 사이의 온도에서 수행된다. 이 프라이머들이 결합하는 자리에서 DNA 폴리머라아제가 DNA 합성을 시작할 준비를 한다. 마지막 단계는 신장 단계로, 이 단계에서 DNA 폴리머라아제는…