SDS-PAGE , cell lysis, buffer관련 레포트 (A＋자료)

1. SDS-PAGE

β-메르캤토에탄올 또는 디티오스로레이트)를 사용하여 단백질의 이황화 결합을 끊는 과정이 포함된다. 이를 통해 단백질은 선형 상태로 변해 전기영동 시 더하게 이동할 수 있다. 또한, 샘플에 불필요한 물질이나 세포 잔여물이 포함되지 않도록 세척 및 정제하는 과정도 필요하다. 젤 제조 단계에서는 아크릴아미드와 비스아크릴아미드로 이루어진 젤 구조를 만들기 위해 특정 농도로 캐스팅한다. 이 젤은 단백질 분리의 매트릭스 역할을 하며, 단백질의 분자량에 따라 크기가 다른 공간을 제공한다. 젤의 농도가 높을수록 작은 단백질은 잘 분리되지만 큰 단백질은 잘 이동하지 못하므로, 분석할 단백질의 크기에 따라 적절한 젤 농도를 선택해야 한다. 전기영동 단계에서는 젤에 변성된 단백질 샘플을 로딩한 후 전기를 인가한다. 이 과정에서 SDS는 단백질에 부착되어 단백질의 음전하를 증가시킨다. 따라서 전기장을 인가하면, 단백질은 양극 쪽으로 이동한다. 이때 단백질이 젤을 통과하는 속도는 단백질의 크기에 반비례한다. 즉, 작은 단백질일수록 젤을 더 빠르게 통과하고, 큰 단백질은 이동 속도가 느리다. 일정 시간이 경과한 후, 전기영동이 완…