Western Blot (protocol 요약)

1. Western Blot

Western Blot은 단백질의 존재 및 양을 확인하고, 이들 단백질의 크기와 특성을 분석하기 위해 사용되는 생화학적 기법이다. 이 방법은 샘플에서 단백질을 분리하고, 이를 특정 항체를 이용해 검출하는 과정을 포함한다. Western Blot의 첫 단계는 샘플 내의 단백질을 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동(PAGE)을 통해 분리하는 것이다. 이 과정에서 단백질은 크기에 따라 이동하며, 작은 단백질은 젤을 더 멀리 이동하는 반면, 큰 단백질은 이동 거리가 짧다. 이를 통해 단백질 혼합물 내의 다양한 단백질들을 효율적으로 분리할 수 있다. 단백질이 젤에서 분리된 후 다음 단계는 이를 이탈라이트나 니트로셀룰로스 필름과 같은 막으로 전이하는 것이다. 이 전이 과정은 전기적 힘을 사용하여 단백질을 젤에서 막으로 옮겨오는 방식으로 수행되며, 이때 단백질들은 막에 고정된다. 막에 고정된 단백질은 이후 항체 분석을 통해 검출된다. 이 차별적인 검출을 가능하게 하는 것은 기초적인 특이성이 있는 항체를 사용하는 것으로, 특정 단백질에 대해 결합하는 1차 항체가 사용된다. 1차 항체는 목표 단백질과 특이적으로 결합하여 이를 태그하는 역할을 한다…