western blot

1. objective

Western blot은 특정 단백질의 존재와 양을 분석하는 생화학적 방법론이다. 이 기술의 주요 목표는 생물학적 샘플에서 특정 단백질을 검출하고 그 발현량을 정량적으로 평가하는 것이다. Western blot은 단백질의 분리, 전이, 그리고 탐지를 아우르는 여러 단계를 포함한다. 첫 번째 단계는 단백질을 SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) 기법을 통해 샘플에서 분리하는 것이다. 이 단계에서 단백질은 크기에 따라 분리되며, 이때 SDS라는 음전하를 띤 계면활성제가 단백질의 2차 및 3차 구조를 변형시켜 일렬로 정렬시킨다. 단백질이 분리된 후, 이것들을 전문성 있는 막인 PVDF(Polyvinylidene difluoride) 막이나 니트로셀룰로오스 막으로 전이하는 과정이 진행된다. 이 전이 과정에서 단백질은 겔에서 막으로 이동하여 고정된다. 이후, 막에 특정 단백질을 인식할 수 있는 항체를 사용하여 탐지하는 단계로 넘어간다. 1차 항체는 타겟 단백질에 직접 결합하며, 질 높은 특이성을 통해 원하는 단백질을 선택적으로 인식한다. 그 후 2차 항체가 1차 항체에 결합하여 신호를 증폭하고, 보통 효소나 형광물질로 표지되어 있…