190313-Western blots- Lee YK

1. Buffers

Western blotting에서 버퍼는 실험의 성공에 중요한 역할을 한다. 일반적으로 사용되는 버퍼는 샘플을 준비하고 단백질을 전기영동하는 과정에서 각각의 단계에서 적절한 환경을 제공한다. 이 과정에서 사용되는 대표적인 버퍼에는 라디오렉스 버퍼, 트리스-글리신 버퍼, 그리고 SDS-PAGE 버퍼 등이 있다. 이들 각각의 버퍼는 특정한 pH와 이온 강도를 유지하기 위해 설계되었으며, 단백질의 안정성과 활성성에 큰 영향을 미친다. 먼저, 샘플 준비 단계에서 사용하는 라디오렉스 버퍼는 단백질을 분해하고, 변성을 촉진하는 역할을 한다. 이 버퍼는 주로 트리스(Tris)와 글리신(Glycine) 혼합물로 구성되어 있으며, pH는 일반적으로 중성에 가깝게 유지된다. 이 환경은 단백질이 자연 상태에서 쉽게 변형될 수 있도록 도와주며, 폴리펩타이드가 전기영동 과정에서 잘 분리될 수 있도록 한다. 전기영동 과정에서 주로 사용되는 트리스-글리신 버퍼는 단백질 간의 전기적 이동을 보장하는 역할을 한다. 이 버퍼는 전기장에 대한 저항을 최소화하는 특성이 있으며, 따라서 단백질이 올바르게 이동할 수 있도록 돕는다. 또한, pH가 일정하게 유지되며, 이는 단백질…