서강대학교 현생실1 6x his tagged eGFP 단백질의 발현 및 정제

1. Abstract

본 연구는 서강대학교 현생실1에서 6x his 태그가 부착된 eGFP 단백질의 발현 및 정제를 목표로 하였다. eGFP는 초록색 형광 단백질로, 생물학적 연구에서 널리 사용되며 단백질의 위치 확인 및 세포 내 과정을 추적하는 데 강력한 도구가 된다. 이번 실험에서는 eGFP의 발현을 유도하기 위해 원형 DNA 벡터에 6x his 태그를 부착한 형태로 클로닝을 진행하였다. 이를 위해 E. coli BL21(DE 균주를 숙주로 사용하고, IPTG를 유도제로 투여하여 발현을 유도하였다. 발현 후, 단백질 추출을 위해 세포를 원심분리하고, 리소졸브를 이용하여 세포 내 단백질을 용해하였다. 이후 혼합물에서 6x his 태그를 가진 eGFP 단백질을 선택적으로 분리하기 위해 니켈 침대 크로마토그래피(Ni-NTA chromatography)를 활용하였다. 이 과정에서, 6x his 태그가 니켈 이온과의 강한 결합력을 활용하여 eGFP 단백질을 정제하였다. 정제된 단백질은 SDS-PAGE 겔 전기영동을 통해 품질을 평가하였으며, eGFP 단백질의 발현 양과 순도를 확인하였다. 연구 결과는 eGFP 단백질의 효율적인 발현과 정제가 가능하였음을 보여주었다. 이 연구는 향후 eGFP 단백질을 이용한 다양한 바이…