[실험] Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis

1. 실험제목 : Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis

2. 실험날짜 : 2004년 11월 27일 토요일

3. 제출자 및 공동 실험자

4. 목적
☞ Plasmid DNA를 restriction enzyme으로 자른 후 DNA size marker와 비교하여 본다.

5. 원리
☞ Restriction enzyme digestion
제한효소(restriction enzyme)는 DNA 분자내의 특정한 염기서열을 인식하고, 인지한 서열내, 혹은 근처의 특정한 부위에서 double stranded DNA를 절단하는 균주 특이성이 있는 endonuclease이다. 이것은 세포 내로 침입해오는 virus나 외래의 DNA를 절단하여 제거하는 세균의 자기방어기구로 존재한다. 세균은 자신의 DNA에서 인식절단 부위의 염기를 methylation 시키기 때문에 자신의 제한효소 작용으로부터 보호된다.

ⅰ) Type Ⅰ enzyme
Type Ⅰ enzyme은 3개의 서로 다른 subunit인 R, M, S (restriction, methylation, sequence recognition을 담당)로 구성되어 있다. Target site가 S subunit에 의해서 인식되면 DNA와 결합한 enzyme은 곧이어 restriction이나 modification을 시킨다. Cleavage는 enzyme이 인식하는 특정한 recognition sequence로부터 >1,000 b.p …