[실험] Purification of Thermostable DNA Polymerase

1st day
(1)Seed Culture : 3ml LA media(LB + ampicillin)에 single colony를 접종한 후 37℃ 에서 overnight culture한다.

2nd day
(1) 200ml LA media에 seed culture 2ml을 inoculation하여, 37℃ 에서 O.D.600nm ~0.5가 될 때까지 진탕배양 한다.
(2) Induction : IPTG를 final concentration 0.5mM이 되도록 첨가한 뒤, 14~16시간 동안 37℃ 에서 진탕배양 한다. (1M IPTG 100ul 첨가)

3rd day
(1) Harvest : culture를 각각 500ml centrifugation tube로 옮긴 뒤 high speed centrifuge로 6,000 rpm/10 min/4℃ 에서 centrifugation 한 후 media를 제거한다.
(2)20ml Buffer A로 pellet을 resuspension한 후 위와 동일한 조건에서 centrifugation 하고, supernatant 제거한다.
-이과정까지는, 조교님께서, 미리 실험 해 놓음.
(3) Cell lysis : pellet에 10ml의 Buffer A와 final conc. 4mg/ml로 lysozyme을 넣고 resuspend한 후, R/T에서 15분 동안 incubation한다. (Rotator 이용)

(4) Buffer B를 10ml 첨가한 뒤 75 ℃ 에서 10분 간격으로 sample을 잘 섞어주며 1시간 동안 incubation하고, high speed centrifuge로 12,000 rpm/20 min/4 ℃…(생략)