세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 실험방법

15. TE완충액 200ul에 피펫으로 추출한다.
* TE- TE 및 EDTA는 DNA 분리 정제할때 첨 쓰는 용액인데 주로 고장액 상태로 만들어서 세포벽을 깨주는 역할을 한다. 또한 깨진 상태에서 DNA의 안정화를 목적으로 쓴다.

16. 나트륨 아세트 3M에 20ul를 첨가한다.
17. 평행을 유지한 상태로 1/2 첨가. 페놀, 클로로포름, isoamyl alcohol-1:24:1 비율로 섞는다.
* 이건 phenol extraction 에 사용된다.
즉 100 ml 을 만든다고 하면
chloroform을 96 ml 넣고 4 ml 을 isoamy alchol 로 넣으면 된다.

18. 충분한 속도로 4도에 5분동안 원심분리한다.
19. e.p tube 에 최상층부에 DNA가 형성이 된다.
- e.p tube 밑 하단부를 조심스럽게 잡는다.
20. ice-cold 100% 에탄올의 0.5ml를 첨가한다.
21. 5분동안 ice box에 튜브를 넣어둔다.
22. 4도에 15분동안 15000rpm으로 원심분리한다.
23. 작은 알들이 생성이 되지 않도록 조심스럽게 에탄올을 버린다.
24. ice-cold 70% 에탄올에 1ml를 첨가하고 섞는다.
25. 4도에 15분동안 15000rpm으로 원심분리한다.
26. 작은 알들이 튀지않도록 조심스럽게 에탄올을 버린다…