PCR에 관하여

☞ PCR PCR은 polymerase chain reaction의 약자로 한글로 풀어 얘기하자면 중합 효소 연쇄 반응이라 할 수 있겠다. DNA의 양쪽 가닥을 주형으로 DNA를 선택적으로 증폭시키는 방법으로 DNA 복제에 있어서 꼭 필요한 방법이다. 일반적으로 PCR 과정은 크게 Predenaturation후 DNA denaturation, primer의 annealing, extension 의 세과정을 반복한 다음 end filling 을 거쳐 4℃에서 보존하게 된다. 1. Predenaturation : 94℃에서 3분간 진행. 2. DNA denaturation : 94℃에서 15초에서 1분간을 표준으로 하지만 30초로도 충분. 너무 길면 DNA polymerase에 이상이 생길 수 있음. 3. Primer Annealing : 제작한 primer에 따라 다름. primer을 제작하는 프로그램이나, 제작해 주는 회사에서 Tm값을 알려줌. 주로 55℃에서 60℃사이로 만들어지며 통상 30초에서 1분을 사용함. 4. Extension : 신장반응에 필요한 시간은 주형 DNA의 농도, 증폭단편의 크기, 반응온도에 따라 좌우되지만 일반적으로 Taq polymerase를 사용할 경우 72℃에서 1kb이하는 1분, 그 보다 긴 경우는 1kb당 1분의 비율로 길게 설정. 즉, template가 3kb인 경우 3분으로 하겠죠.. 5. 2번부터 4번과정을 25회에서 30회가량 반복. 6. End filling : 주형 DNA의 3`쪽의 충분한 Extension을 위해 72℃에서 10분간 실시. 8. 4℃에서 보관. 여기서 중요한 세 단계는 DNA denaturation, Annealing, Extension이다. -Denaturation DNA의 당인산 연결은 인산 에스테르 결합이라는 공유 결합으로 이루어져 있어 염기간의 결합인 하이드로젠 결합보다 강한 힘으…
DNA의 당인산 연결은 인산 에스테르 결합이라… -Annealing