복제양 돌리

3) 핵의 이식 공여핵을 수핵난자 내에 이식하는 방법은 크게 세포융합(cell fusion)과 세포질내 직접주입법(intracytoplasmic cell injection; ICCI)으로 나눌 수 있다. 세포를 융합시키는 기술로는 핵이식 후 화학물질에 노출시킨다든지, 비활성화된 센다이 바이러스(Sendai virus)를 주입한다든가 전기자극을 가하는 등의 방법이 있으나 최근에는 간편하고 재현성이 우수한 전기자극법이 보편적으로 이용된다. 후자는 인간의 불임클리닉에서 이용하는 정자직접주입법(intracytoplasmic sperm injection; ICSI)을 응용한 것으로 미세관을 사용하여 현미경 하에서 공여핵을 수핵난자 내에 직접 주입하는 방법이다. 이는 공여핵의 크기가 작아 융합이 어려운 경우에 시도하고 있다. 4) 난자활성화와 리모델링 일반적으로 동물의 체내에서 난자와 정자가 융합되면 수정된 난자는 활성화되면서 분열을 시작하게 된다. 이 과정은 핵을 이식한 난자를 여러 가지 방법으로 처리하여 이와 흡사한 현상을 보이도록 자극하는 것이다. 난자를 인위적으로 활성화하기 위해서는 전기자극법, Ca-ionophore(A23187)라는 종류의 약물과 단백질합성억제제의 병행처리법 등이 전통적으로 사용되어 왔다. 전기자극법은 난자의 활성화가 전기적 세포융합과 동시에 이루어질 수 있기 때문에 간편하지만 현재는 Ca-ionophore계열의 ionomycin과 인산화억제제인 6-DMAP를 사용한 융합후 활성화가 일반적으로 적용된다. 한편 분열촉진인자(MPF) 수준이 높은 상황에서 융합된 외래 핵은 일시적으로 핵막이 붕괴하고 염색체가 응축되는데 이런 과정을 리모델링이라 한다. 최근에는 융합 후 일정 시간이 흐른 뒤 화학적 또는 전기적 방법으로 리모델링을 유도한 핵이식란이 우수한 발육률을 보여 융합 후 일정 시간 동안 높은 MPF수준을 유지하여 리모델링을 거치는 것이 이식된 핵의 재프로그래밍에 유효할 지도 모른다는 주장이 제기되고 있다.