Mini-prep 실험

3. 실험 과정 : ①. E-coly균을 spectrafuge로 5분간 600rpm으로 돌린 상층액만 따낸다. ②. solution 1을 300microℓ씩 주입후 vortexing 한다. ③. solution 2를 300microℓ씩 주입후 shaking 한다. ④. solution 3을 300microℓ씩 주입후 shaking 한다. ⑤. 얼음에 넣은후 5분정도 기다린다. ⑥. 14000rpm으로 10분정도 spectrafuge에 돌린다. ⑦. 다른 E-tube에 상층액 분리시킨다. ⑧. 분리된 상층액에서 550microℓ isopropyl Alchol로 Dna만 침전 시킨다. ⑨. 14000rpm으로 5-10분정도 spectrafuge를 돌린 후 상층액을 버리고 밑에 Dna만 남겨 놓는다. . Etoh을 300microℓ 넣어 불순물은 걸러준다. . 1분정도 spectrafuge에 넣고 돌린후 vaccum에 넣어 말린다. . t.e buffer , RNASE를 넣어 불순물 제거해준다. 4. 실험 원리 : 기본적인 원리는 세균의 cell wall 과 cell membrane 을 부수고 plasmid DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA 와 plasmid DNA 를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA 이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 chromosomal DNA 는 분리 과정에서 linear 형태이며 크기가 비교적 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. lysozyme은 달걀 흰자와 눈물이나 타액과 같은 분비물에 존재하는 효…
4. 실험 원리 : 기본적인 원리는 세균의 cell wall 과 cell membrane 을 부수고 plasmid DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 …