생화학 실험

- 실험에 대한 고찰- 1. 실험값: lowry 의 방법을 사용하여 얻었다. 단백량이 용액에 녹아 있는 양이 많을수록 시약에 있는 구리 2가 이온과 반응하여 색이 달라지면 그것의 흡광도를 측정하여 용액의 단백량을 추정하는 방법이다. 우리는 단백질을 전혀 넣지 않은 것의 흡광도를 0으로 설정하고 단계적으로 단백량을 늘려 흡광도가 그것이 비례하는 것을 관찰하고 그래프를 그렸다. 그리고 단백질의 양을 모르는 미지의 시료의 흡광도를 측정하여 그 그래프의 y 축에 해당하는 값의 x 값이 바로 미지 시료의 농도라고 생각했다. Beer’s law 에 따르면 흡광도는 통과하는 시료의 두께와 농도에 비례하기 때문이다. 그때 얻은 미지의 시료의 흡광도에 따른 단백질의 양은 2.734 μg/mL였다. 2. 원래 값: 우리가 측정한 미지시료 C 의 원래 단백질 양은 1.4 μg/mL 였다. 실험값은 원래 값의 195 % 오차를 보였다. 그리고 Western blotting 으로 양을 보았더니 A 시료와 B 시료 다음으로 두께가 보여야 했는데 우리가 실험한 C 값의 두께는 다른 조의 미지시료의 것보다 상대적으로 두꺼웠다. 3. 오차 값에 대한 고찰: 오차 값이 나타난 가장 큰 원인은 피펫팅에 있었다고 본다. 두 가지의 피펫팅의 오류가 있을 수 있다. A. 단백질을 희석할 때의 피펫팅 오류: 단백질 표준 용액을 넣고 증류수를 더하여 희석할 때 증류수의 양을 정확히 재지 않아 단백질의 희석농도가 정확하지 않을 수 있다. 따라서 lowry 검출을 할 때 구리 이온과 농도에 따른 비례가 성립하지 않을 수 있다. B. 시약을 만들 때의 오류: 검출 시약을 만들 때 3가지의 시약을 적절한 비율로 혼합하여 만든다. 이 때 피펫팅을 적절히 하지 못하여 시약을 잘못 만들었을 때 실험이 오차가 생길 수 있다. -단백질 전기영동과 Western blot – 1. 전기영동의 원리: 전기영동이란 간단하게 콜로이드 용액 속에 전극…
1. 전기영동의 원리:…