미생물학 실험의 기본조작

5. 협막 염색(Capsule staining) 목 적 (1) 음성염색(negative staining)을 실시할 수 있어야 한다. (2) 협막과 협막유사물을 구별할 수 있어야 한다. 원 리 세균의 세포막은 협막(capsule) 또는 점액층(slime layer)으로 둘러싸여 있으며 세균의 종류와 배양조건에 따라 협막의 성분, 두께, 경도 등이 다르다. 환자에서 분리된 병원성 세균에서 협막을 쉽게 관찰할 수 있으며 그 중에서 Bacillus anthracis, Neisseria intracellularis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae 등이 협막을 갖고 있는 병원성 세균들이다. 음성 염색법은 세균을 고정하지 않고 염색하여 검사물에서 협막형성균을 관찰하는 방법이며 염색액으로는 구성입자가 너무 커서 협막내로 들어갈 수 없는 먹물(india ink)과 단염색에서 사용하는 염기성 염료를 사용한다. 이 염색에서는 배경은 먹물로 염색되고, 세균은 염기성 염료에 의해 염색되나 협막은 염색이 되지 않아 세균과 배경 사이에 투명대(clear zone)로 나타나게 된다. 재 료 (1) 영양액체배지에 18시간 배양한 Klebsiella pneumoniae (2) 먹물(india ink) (3) Safranin (4) 슬라이드 글래스 방 법 (1) 슬라이드 글래스 한 끝에 균액을 백금이로 한방울 떨어뜨려 놓는다. (2) 균액과 동일량의 먹물을 균액 옆에 떨어뜨린다. (3) 다른 슬라이드 글래스를 45。각도로 쥐고 한 쪽 끝으로 잘 혼합하여 밀어서 도말한다. (4) 도말 표본을 공기 중에서 건조시킨다. (5) 말린 도말 표본을 불꽃 위에서 가볍게 고정시킨다. (6) Safranin액으로 1분간 염색한 후 물로 씻어낸다. (7) 표본을 다시 건조시며 경검한다. * 검은 배경에 균체는 적색 또는 분홍색으로, 협막은 투명대로 나타난다. Ⅳ. 세균…
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