nuclease

6) 시약 회사에서 추천하는 완충용액의 종류가 다른 경우에는 활성이 약 한 완충용액을 사용하는 경우 효소의 양을 증가시켜 사용해도 무방하 다. 예를 들어 Eco RI과 Bam HI을 함께 사용하는 경우 H 완충용액 을 사용하면 Bam HI의 활성이 25∼50%밖에 나타나지 않으므로 Bam HI 효소의 양을 평상시보다 2∼4배 정도 사용하면 된다. 이때 B 완충용액을 사용하는 경우는 star activity가 생길 수 있으므로 주 의한다. 이런 현상은 Eco RI과 Bam HI을 혼합하여 자를 때 잘 발생 한다. 7) 두가지 효소를 사용하는 경우에도 효소량이 반응 총액의 10%를 넘지 않도록 한다. 8) 최적온도가 다른 두가지 효소를 처리하는 경우 반응액의 조성은 그대 로 두고 온도를 번갈아 처리해도 된다. 그러나 이 경우에도 따로따로 처리하는 것이 바람직하다. 3. 제한효소를 이용한 DNA의 부분적인 절단 이와 같은 실험방법은 cloning하고자 하는 DNA 단편내에 동일한 제한효소 절단부위가 존재하는 경우 또는 제한효소 지도(restriction map) 제작시에 필요한 방법이다. 실험방법은 위에서와 다르지 않지만, 원하는 부분절단 단편 (partial digested fragment)를 최대한으로 얻기 위하여 제한효소량이나 반응시간의 조건을 결정하는 작업이 필요하다. (5) 제한효소의 선택적 인식 서열의 예 특이적 제한효소에 의한 잘림은 다음이 patterns중 하나를 나타낸다. ① Staggered, protruding 5phosphates For example : Eco RⅠ ---> 5---G AATTC---3 ② Stagered, recessed 5phosphates, as with 3-OH protruding ends For example : Pst Ⅰ ---> 5---CTGCA G---3 ③…
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