면역학 실험 레포트

1.실험내용

-실험목적: sandwich ELISA를 이용하여 개 혈청의 IgM을 정량,정성분석 한다.
-실험준비물: Capture Ab(Goat α-Dog IgM), Blocking Reagent(3%BSA/PBS),
Detection Ab(Goat α-Dog IgM-HRP), PBS-T, TMB, stop solution,
ELISA reader, pipette, tube, plate, 거즈, Dog serum.
-실험과정(실제 했던 실험이 아닌 해야했던 실험과정)
i) A~H까지있는 plate의 각각의 well에 Capture Ab(Goat α-Dog IgM)를 넣어준다.
→sandwich ELISA를 위해 plate바닥에 Ab를 코팅하기위해서
ii) 넣었던 Capture Ab를 버리고 PBS-T(200μl)를 이용해 3회 씻어준다.
→넣고,흔들고,털고를 3회반복. washing이 더 잘되도록 해주는 개면활성제인 Tween20
을 넣어준 PBS-T는 불순물을 제거해준다.
iii) 100μl의 Blocking Reagent(3%BSA/PBS)를 넣어줘서 Capture Ab외의 물질이 plate
바닥에 달라붙지 못하도록 코팅해준다. 그리고 1시간 기다린후 PBS-T로 3회씻어준다.
iv) 100μl의 농도를 알수없는 Dog serum을 A에 넣고, 200μl의 100배 희석된 Dog serum 을 B에 넣는다. C에 100μl의 PBS와 B용액의 100μl를 넣고 섞은다음 D에 100μl을 옮 긴후 D에 100μl의 PBS를 넣고 섞은다음......G까지 하다보면 각각의 Plate는 100μl의 농도가 다른 용액이 들어있게된다.
(A:농도모름 B:10ng/ml, C:5ng/ml, D:2.5ng/ml, E:1.25ng/ml,…

2.ELISA reader or Microplate reader or Spectrophotometer