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PCR의응용
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PCR의응용
목차/차례
- Ⅰ. 서 론························
- 1. PCR(Polymerase Chain Reaction)·············
- 2. PCR기계의 종류·····················
- Ⅱ. 본 론························
- 1. PCR의 원리·······················
- 2. PCR의 구성시약과 반응조건···············
- 1) 내열성 DNA polymerase와 반응조건···········
- 2) primer·························
- 3) PCR cycle·······················
- 3. PCR의 반응 특이성···················
- 4. PCR 생성물의 혼입 위험성················
- 5. PCR의 응용·······················
- 1) 비대칭 PCR에 의한 직접 염기 서열 결정법········
- 2) 경합 PCR에 의한 mRNA 정량··············
- 3) RACE법························
- 4) O-157의 검출·····················
- 5) PCR을 이용한 병원성 효모의 빠른 동정법········
- 6) Pathogen의 검출····················
- 7) Human genetics····················
- 8) Evolutionary biology··················
- 9) Genetic fingerprinting··················
- 10) PCR에 의한 닭고기 중 Listeria monocytogenes의 직접 검색··
- 11) PCR에 의한 한국인 혈우병 A 환자의 유전자내 BclⅠ 및 XbaⅠ RFLP양상에 관한 연구··············
- 12) 그 밖의 응용분야···················
- 6. RT-PCR························
- 1) RT-PCR법의 원리···················
- 2) RT-PCR법에 따른 실험예················
- Ⅲ. 결 론························
- Ⅳ. 참고문헌························
본문/내용
2. PCR의 구성시약과 반응조건
PCR은 원리가 단순하고 조작이 간편한 DNA증폭법이며, 사용하는 시약도 단순한 편이다. 그러나 반응조건은 복잡하여 조건의 설정이 어렵다.
1) 내열성 DNA polymerase와 반응조건
현재 가장 널리 사용되고 있는 것은 Thermus aquaticus라는 내열성 균에서 분리된 Taq DNA polymerase이다. 이 효소는 pH 8.3 - 8.8, 온도 70℃-75℃ 정도에서 가장 잘 작용하며 94℃ 에서 40분 정도 유지해도 50%의 잔존활성을 나타낸다. PCR에서는 1 - 2.5단위(unit)가 사용된다. 활성의 발현에는 Mg2+가 필요하고, primer나 deoxynucleotide가 효소에 결합할 때 작용하며, 그 농도는 PCR의 특이성에 큰 영향을 미친다. 통상 0.5 - 2.5mmol/l의 농도 범위로 사용된다. deoxynucleotide triphosphate(dNTP)는 20 - 200 mmol/l의 농도로 사용되지만, 그 이상의 고농도는 Taq DNA polymerase가 DNA 서열을 잘못 읽는 원인이 된다. Taq DNA polymerase는 잘못 들어온 염기를 올바른 배열로 고치는 3` - 5` exonuclease 활성을 가지지 않는다. 따라서 반응조건에 의해서 읽기 잘못을 일으키는 빈도가 높아지며 잘못된 결론에 도달할 우려가 있다. 통상의 …
PCR은 원리가 단순하고 조작이 간편한 DNA증폭법이며, 사용하는 시약도 단순한 편이다. 그러나 반응조건은 복잡하여 조건의 설정이 어렵다.
1) 내열성 DNA polymerase와 반응조건
현재 가장 널리 사용되고 있는 것은 Thermus aquaticus라는 내열성 균에서 분리된 Taq DNA polymerase이다. 이 효소는 pH 8.3 - 8.8, 온도 70℃-75℃ 정도에서 가장 잘 작용하며 94℃ 에서 40분 정도 유지해도 50%의 잔존활성을 나타낸다. PCR에서는 1 - 2.5단위(unit)가 사용된다. 활성의 발현에는 Mg2+가 필요하고, primer나 deoxynucleotide가 효소에 결합할 때 작용하며, 그 농도는 PCR의 특이성에 큰 영향을 미친다. 통상 0.5 - 2.5mmol/l의 농도 범위로 사용된다. deoxynucleotide triphosphate(dNTP)는 20 - 200 mmol/l의 농도로 사용되지만, 그 이상의 고농도는 Taq DNA polymerase가 DNA 서열을 잘못 읽는 원인이 된다. Taq DNA polymerase는 잘못 들어온 염기를 올바른 배열로 고치는 3` - 5` exonuclease 활성을 가지지 않는다. 따라서 반응조건에 의해서 읽기 잘못을 일으키는 빈도가 높아지며 잘못된 결론에 도달할 우려가 있다. 통상의 …
참고문헌
http://home.mokwon.ac.kr/~nschang/intro/room/protocol/33.html
http://bohan.co.kr/doc/ls&bt/15/36.htm
http://www.hitel.net/~choijinh/mol_bio/molbio_main.htm
http://seed.kyungsung.ac.kr/~g1998242301/pcr.htm
http://www.bioneer.co.kr/products/pcr.html
http://www.immunoblot.com/pcr.htm
http://ee.uos.ac.kr/~dhlee/ldh12.htm
http://bifido.net/HTML-data/clon/PCR의%20원리와%20응용.htm
http://cowboys.gsnu.ac.kr/hjkang/paper/paper-04.htm
http://plaza.snu.ac.kr/~ymchoi/bcl.html
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I D : rimm****** Date : 2011-12-28 FileNo : 16146295 |
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