[실험] 에탄올 침전법

1. 실험 제목 :　Ethanol Precipitation

2. 실험 목적 : PCR로 원하는 DNA를 증폭한 후에 Ethanol을 이용하여 DNA만을 추출해 낼 수 있다.

3. 이론 및 원리

(1) DNA Precipitation

PCR 생산물을 정제할 때 PCR 반응에 사용한 올리고 DNA 프라이머 및 기질 dNTP를 완전히 제거하지 않으면 안 된다. 왜냐하면 dNTP는 본래의 sequencer반응을 저해하기 때문이다.
DNA는 적당한 salt(염) 농도와 적당한 alcohol 농도 하에서 침전된다. DNA 침전에 쓰이는 조 건들은 다음과 같다.
Ethanol : 2～2.5 volume
sodium acetate(pH 5.2) : commonly used
sodium chloride : DNA containing SDS
ammonium acetate : triphosphate removal
inhibits T4 polynucleotide kinase and TdT
lithium chloride : RNA precipitation, very soluble in ethanol
inhibits reverse transcription
Isopropyl alcohol : 2～2.5 volume
일반적으로 DNA를 침전시켜 농축시킬 때는 위와 같은 alcohol 침전법을 많이 사용한다. 주로 ethanol이 많이 쓰이며, 알콜 침전시에는 monovalent salt ion(sodium이나 potassium 등)이 필요 한데, 위와 같이 여러 가지를 쓸 수 있으며 목적에 따라서 필요…
일반적으로는 ethanol과 sodium acetate의 조합을 가장 많이 쓴다.