질소고정

공생질소고정 근류균 근류균을 분리하는 방법은 크게 토양에서 직접 분리하는 법과 근류로부터 분리하는 방법으로 나눌 수 있다. 토양에서 근류균을 직접 분리하는 방법으로는 많은 선택배지가 사용되고 있지만 평판배지상에서는 토양중에 서식하고 있는 비슷한 균과의 구별이 어렵다. 근류에서 분리하는 방법에는 토양 또는 토양 희석액을 두과식물의 종자에 접종하여 근류를 착생시켜 분리하는 법과 자생 또는 재배되고 있는 두과식물에서 근류를 채취하여 근류균을 분리하는 방법이 있다. 여기서는 근류에서 분리하는 방법에 대하여 설명하고자 한다. 근류채취 근류채취시기는 봄부터 초여름까지가 가장 적당하다. 그 이유는 근류는 지상부가 개화기를 지나면 파괴되어 근류중의 근류균이 다시 토양으로 환원되기 때문에 그 이전 또는 질소고정이 왕성한 시기에 신선한 근류를 채취한다. 근류의 표면에는 토양입자 뿐만 아니라 많은 잡균이 부착되어 있으므로 우선 근류를 깨끗이 물로 씻어내어 토양입자를 제거한다. 근류표면이 약하거나 작은 것은 어느 정도 물로 씻은 다음 소형용기에 넣고 용기의 1/3 정도가 되게 물을 넣고 용기를 가볍게 진탕시키며 용기내에서 수회 반복 세척한다. 근류가 작은 경우에는 세척에 이용된 용기 그대로 근류를 넣고 살균액(0.1%, HgCl2)을 일간 용기의 최상부까지 가하여 용기내를 살균한다. 1∼2분 후 승홍수 1/3정도를 남겨놓고 버린 후 3∼4분간 살균한다. 그러나 아카시아 등의 수목의 근류는 표면이 강하고 크므로 살균시간을 5∼7분까지 연장하거나 물 1ℓ에 승홍 1g과 진한 염산 5 ㎖를 가해서 살균액으로 하여 4∼5분간 살균한다. 근류표면의 살균이 끝나면 승홍수를 별도의 용기에 따르고 살균수로 용기 내부와 근류표면에 승홍수가 남아 있지 않게 세척한다. 세척은 살균수를 가해 잘 진탕하여 세척하는 과정을 4∼6회 반복한다.