효소의 특성

1. 실험목적

amylase의 작용이 온도와 pH 조건에 따라 어떤 영향을 받는지 조사하고, 최적 온도 및 pH 조건을 찾는다.

2. 재료 및 방법

(1) 재료

α-amylase(from Bacillus amyloiquefaciens)
1% starch용액
0.1N Iodine용액
TE buffer (Tris-EDTA buffer pH 3.0 , pH 7.0, pH 10.0)
D.W.
항온수조(water bath)
시험관
시험관대
파이펫
얼음
온도계

(2) 방법

1. 효소의 작용에 미치는 온도의 영향

1) 6개의 시험관에 ①~⑥까지 labeling 한다.

2) 각 시험관에 2ml의 녹말용액, TE buffer(pH 7.0) 1ml, D.W. 1ml을 넣는다.

3) ①②번 시험관은 4℃(얼음), ③④번 시험관은 40℃(water bath),

⑤⑥번 시험관은 70℃(water bath)에서 5분간 incubation한다.

3) 요오드를 20ul 넣는다.

4) ②④⑥번 시험관에 각 40ul의 α-amylase을 가하여 잘 섞고. 해당 온도에 놓아둔다.

5) 5분 후, 각 온도에서 enzyme이 들어가지 않은 시험관과 비교하여 발색반응이 어떻게 바뀌었는지 관찰하고 α-amylase의 최적 활성 온도를 결정한다.

2. 효소의 작용에 미치는 pH의 영향
1) 3개의 시험관에 ①~③까지 labeling한다.
2) 각 시험관에 2ml의 녹말용액과 1ml의 D.W.를 넣는다.
3) TE buffer pH 3.0, 7.0, 10.0 용액 1ml를 ①②③에 각각 넣고 잘 섞어준다.
…

6) 70℃ water bath에 다시 넣고 발색반응이 어떻게 변하는지 관찰한다.