Proteasome 활성도 조사

이번 실험에서는 근원세포와 근관세포의 chymotrypsin-like activity를 비교함으로서 근육세포 분화에서 proteasome의 중요성을 확인해본다. proteasome의 활성을 측정하기위해 N-succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-7-amido-4-methylcoumarin(SLLVY-AMC)이라는 합성물질을 사용하여 proteasome이 활성화되면 proteasome이 peptide의 tyrosine 잔기의 carboxyl 말단을 자르게 되고 잘려진 AMC는 자유로운 상태가 됨으로 형광을 나타내게 된다.(반대로 AMC는 peptide와 결합되어 있을땐 형광을 나타내지 않는다.) 이렇게 나타난 형광을 형광광도계로 380nm의 excitation light에서 AMC를 흥분시켜 440nm의 emission light에 노출시켜 그 값을 측정함으로써 활성정도를 알 수 있게 된다. 결과를 분석하기 전 미리 결과를 예측해보면 근원세포에서는 증식이 한참 일어나고 근관세포에서는 증식이 멈추고 분화가 일어나므로 proteasome의 활성은 증식이 활발한 근원세포에서 보다는 근관세포에서 더 클 것이라는 예상을 할 수 있다.