단백질 전기영동

1.Title: 단백질 전기영동(1) 2.Date: 2004.11.02 3.Object: 전기영동을 통하여 식물내의 단백질을 알아보자 4.Material & Method : 식물의 잎, 줄기 혹은 뿌리, 에펜튜브, 원심분리기, heat plate, lysis buffer, SDS-PAGE sample buffer, 파이펫, 막자사발, 얼음튜브 ① 단백질을 정량할 식물의 부분을 막자사발을 이용하여 lysis buffer(1ml)와함께 갈아준다. ② 원심분리를 한다.(max5분 정도) ③ 2번의 상층액(100㎛) 을 2X SDS-PAGE sample buffer와 섞는다. ④ 원심분리를 한다.(max에서 5분정도) ⑤ 90℃이상에서 5분정도 가열한다. ⑥ 식힌다. -보관 5.Further study -용액의 조성 1 X lysis buffer 1% NP-40 120 mM NaCl 40 mM Tris-HCl (pH8.0) + 1 mM PMSF (or 100 ug/ml) >> 250 ul 4℃ 30’ >> 12,000 rpm, 30’ 10 mM Phenylmethyl sulfonyl fluoride (PMSF); Dissolve PMSF in isopropanol at a concentration of 1.74 mg/ml (10mM). Divide the solution into aliquots and store at -20℃. 2 X SDS gel-loading buffer protein sample을 comb으로 만든 lane에 loading할때 loading buffer와 섞은 후에 sample을 loading하게 된다. loading buffer에는 SDS, 2-mercaptoethanol, glycerol등이 들어간다. sample과 buffer를 섞을때 1대1로 섞을 수 있게 만든 것이 2X, 3대1로 섞을 수 있게 만든것이 4X…
protein sample을 comb으로 만든 lane에 loadin…