단백질 전기영동

1.Title: 단백질 전기영동(1)

2.Date: 2004.11.02

3.Object: 전기영동을 통하여 식물내의 단백질을 알아보자

4.Material & Method : 식물의 잎, 줄기 혹은 뿌리, 에펜튜브, 원심분리기, heat plate, lysis buffer, SDS-PAGE sample buffer, 파이펫, 막자사발, 얼음튜브

① 단백질을 정량할 식물의 부분을 막자사발을 이용하여 lysis buffer(1ml)와함께 갈아준다.

② 원심분리를 한다.(max5분 정도)

③ 2번의 상층액(100㎛) 을 2X SDS-PAGE sample buffer와 섞는다.

④ 원심분리를 한다.(max에서 5분정도)

⑤ 90℃이상에서 5분정도 가열한다.

⑥ 식힌다. -보관

5.Further study

-용액의 조성
1 X lysis buffer
1% NP-40
120 mM NaCl
40 mM Tris-HCl (pH8.0) + 1 mM PMSF (or 100 ug/ml)
>> 250 ul 4℃ 30’ >> 12,000 rpm, 30’
10 mM Phenylmethyl sulfonyl fluoride (PMSF); Dissolve PMSF in isopropanol at a concentration of 1.74 mg/ml (10mM). Divide the solution into aliquots and store at -20℃.
2 X SDS gel-loading buffer
protein sample을 comb으로 만든 lane에 loading할때 loading buffer와 섞은 후에 sample을 loading하게 된다. loading b…

6.pre-report