Elution

1.Introduction 이번 실험은 유전자 재조합 실험의 두 번째 단계에 해당한다. pGEM-core에서 f1 ori를 잘라서 pET-28(a)에 붙여야 한다. 그렇기 때문에 이번 실험에서는 pGEM-core를 제한효소를 이용해 자르고 전기영동을 통한 분리로 f1 ori를 얻는 것을 시행한다. 제한효소와 전기영동에 대한 것은 다음과 같다. (1)제한효소 제한효소는 주로 세균이 갖고 있는 DNA를 자를 수 있는 효소(endonuclease)이다. 이는 세균이 외부 DNA(virus)를 제거하기 위한 수단으로 만드는 것이다. 세균 자신의 DNA는 methyl화시켜 보호되므로 피해를 입지 않는다. (2)전기영동 대부분의 생물학적 거대분자들은 전기적으로 전하를 띠며 따라서 전기장에서 이동할 수 있다. 예를 들면 양전하를 띤 단백질용액이 들어 있는 수평관 양쪽에 전지의 끝을 연결하면 분자들은 관의 양전하 끝에서 음전하를 띤 끝으로 이동할 것이다. 이동방향은 전하의 부호에 따르지만 이동속도는 침강에서처럼 전하의 크기에 의존하며 분자의 형태(마찰저항)에 의해서도 영향을 받는다. 분자의 질량은 이동속도에 직접적으로 관여하지는 않지만 마찰계수에 영향을 주는 분자의 표면적이 분자의 질량과 함수 관계일 때 간접적으로 영향을 준다. 분자 생물학에서 이용되는 가장 일반적인 형태의 전기영동은 젤을 이용하는 구획전기 영동 또는 젤 전기영동이다. 이 과정의 경우 분자량만이 분자의 이동속도에 영향을 미친다. DNA gel 전기영동 장치에 들어가는 아가로즈 젤의 경우, 시료를 넣을 수 있는 작은 홈이 있다. 여기에 전하를 흐르게 하면 음전하를 띤 DNA 분자들은 아가로스를 침투하면서 이동한다. 젤은 분자들이 복잡한 그물 형태를 이루고 있어서 거대 분자들은 좁고 뒤틀린 통로를 통해 비집고 이동하게 된다. 그 결과 작은 분자들은 쉽게 지나 갈 수 있으며 결과적으로 이동속도는 분자량 M이 감소함에 따라서 증가한다. 이동거리 D는 M과 다음과 같은 대수 관계를 이룬다. D = a -…
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