면역발색법

전기영동을 마친 gel에서 단백질을 PVDF membrane으로 transfer시킨다. Creatin kinase 에 대한 1차 항체(anti-creatin kinase antibody)를 blocking solution(skim milk)에 희석하여 membrane에 처리한 후 1차 항체를 인지하는 2차 항체(anti-rabbit antibody)도 blocking solution에 희석하여 membrane에 처리한다. 이때 blocking solution은 background를 방지해주는 역할을 한다. 1차 항체는 목표 단백질을 인식하여 결합하고 2차 항체는 1차 항체를 인식하여 결합한다. 2차 항체가 1차 항체에 결합하여 발색하는 것을 관찰하여 목표 단백질의 존재 여부를 알 수 있다. 정확한 결과를 위해 항체의 비특이적 결합을 방지해주는 TBST로 세척해 준 다음 peroxidase의 기질인 luminol이 peroxidase에 의해 산화되면서 푸른색 빛을 내는 것을 X-Ray film, 또는 CCD에 감광시키는 방법인 ECL법을 통해 LAS로 membrane에 시간별로 노출시켜 결과를 얻는다. 이 결과를 통해 우리가 알고자 하는 단백질(creatin kinase)의 존재 여부를 확인할 수 있다.