TLC를 이용한 중성지방의 분리

이번에 실시한 실험은 TLC(thin layer chromatography)를 이용하여 땅콩의 중성지방을 분리하고 그것이 무엇인지를 알아내는 것이었다. TLC는 흡착 크로마토그래피의 한 형태로 유리관이나 플라스틱에 silica gel이나 alumina의 얇은 막을 형성시켜 사용하는 방법으로 전개 방법은 종이 크로마토그래피와 유사하고 전개 시간이 짧고, 분리능이 좋다는 특징이 있다. 우선 분말 silica gel과 HO를 1:2의 비율로 취하고 75초간 격렬하게 흔든 다음 TLC 스캐너 위의 유리판에 silica gel을 부은 후 밀대로 밀어 TLC 판을 제작하였다. TLC 판은 다른 이물질이 흡착되지 않도록 잘 말린 다음 활성화시키기 위해 100~200°C에서 30~60분간 가열한 후 desiccator에 보관하였다. Sample을 조제하기 위해 간 땅콩 5g을 삼각플라스크에 취하고 CHCl와 methanol을 1:1로 혼합한 용액 10ml를 가한 후 잘 흔들어주고 20~30분간 방치하였다. 다음으로 수기를 항량으로 만들어 무게를 잰 후 거름종이에 NaSO를 넣은 상태에서 시료를 걸렀다. 그 다음 수기를 Evaporator에 연결하여 용매를 제거하고 수기의 무게를 잰 후 5%의 용액이 되도록 chloroform을 넣어주었다. Sample의 조제가 끝나면 petroleum ether-diethyl ether-acetic acid를 70:30:2로 혼합한 용액을 TLC chamber에 넣고 12시간 동안 활성화시킨 다음 TLC 판에 standard와 MG, TG, FFA, Cholesterol, 그리고 sample을 spot한 후 TLC 판을 포화된 TLC chamber에 넣고 전개 시켰다. 전개가 다 되면 발색제인 50% HSO를 TLC 판에 뿌린 후 150~180°C에서 가열하여 발색을 시키고 각각의 Rf값을 구하였다. 실험결과 Srandard의 Rf값은 0.778과 0.333, MG는 0.059, FFA는 0.481, 콜레스테롤은 0.9259, Sample은 0.689가 나왔다. 시료의 Rf값을 standard와 비교한 결과 시료의 중성지방은 TG로 판명되었다.

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