DNA의 분리(II)

1. Ampicillin이 60 ml/ml로 첨가된 LB 또는 TB 배양액 3 ml에 박테리아의 colony를 접종하여 37°C 배양기에서 하룻밤동안 흔들면서 키운다. u TB(terrific broth)를 쓰면 보다 짧은 시간 내에 더 많은 균을 얻을 수 있다. Colony의 접종은 loop를 이용하는 것이 원칙이나 이쑤시개를 이용하면 더 간편하게 빨리 할 수 있다. 2. 미세원침관에 빅테리아가 완전히 자란 배양액을 1.5 ml 담고 15,xxxxxx0 rpm으로 1분간 원심분리하여 박테리아를 침전시킨다. 3. 상층의 배양액을 완전히 제거하고 남은 균용액을 다시 넣어서 침전시킨다. 4. 박테리아 침전물에 용액 1을 2xxxxxx ml 넣고 진탕하여 부유시킨다. u 완전히 부유시키지 못하면 효율이 대단히 줄어든다. 원침관의 바닥에 남아있는 균이 없도록 철저히 진탕할 것. u 용액 1, 2, 3의 양은 균의 양에 따라서 달라질 수 있다. 즉 균이 많으면 3xx--xxxx ml를 쓰면 된다. 다만 용액들의 비율을 1:1:1로 쓰면 되는데, 때로는 이 비율을 1:2:1.5로 쓰기도 한다. 그러나 앞의 것이 더 깨끗한 DNA를 얻을 수 있는 것 같다. 실험자에 따라서 용액 1에 RNase A를 2xxxxxx mg/ml 농도로 첨가해서 사용하기도 하지만, 이보다는 과정 10에서 RNase 처리를 해주는 것이 더 좋다. 5. 용액 2를 2xxxxxx ml 첨가하고 뚜껑을 막은 후 시험관을 천천히 5회 정도 뒤집었다 세웠다를 반복하여 혼합한 뒤 5분간 상온에 둔다. 이때 절대로 진탕과 같이 거친 방법으로 혼합해서는 안된다. u 용액 2를 첨가하면 세포가 용해되므로 sample이 맑아지고 점도가 높아지는 것을 관찰할 수 있다. 이 과정에서 심하게 vortex하면 염색체 DNA가 깨져 나중에 섞여서 분리되게 된다. u 만약 5분이 지나도 용액이 혼탁하면 과정 4에서 진탕을 제대로 하지 않았거나 용액의…
u 만약 5분이 지나도 용액…