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Spectrophotpmeter를 이용한 DNA 용액의 농도측정
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Spectrophotpmeter를 이용한 DNA 용액의 농도측정.hwp
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자료설명
DNA 용액의 농도를 측정하는데 가장 많이 사용되는 방법인 자외선 흡광 광도법에 대한 자료입니다. 연관분야 공부하시는데 모쪼록 도움이 되길 바랍니다. 다들 좋은 레포트 쓰시길 바랍니다.
목차/차례
<실험방법>
<참고문헌>
<실험재료>
<실험방법>
<참고문헌>
<실험재료>
<실험방법>
본문/내용
DNA 용액의 농도를 측정하는데 가장 많이 사용되는 방법은 자외선 흡광 광도법이다. 이중나선 DNA의 염기는 260 nm의 파장에서 최대 흡광도를 지니고 있으며, 이 파장에서 DNA의 흡광계수는 E260 = 20이다. 따라서 1 mg/ml의 농도를 지니고 있는 DNA의 흡광도는 A260 = 20이 되며 DNA농도와 A260 값은 정비례 관계에 있기 때문에 50 ㎍/ml = 1 A260 unit의 환산계수를 사용하여 DNA의 농도를 측정할 수 있다. 그러나 이 관계식은 G+C 함량이 50%인 정제된 이중나선 DNA에만 적용되며 DNA 용액 내에 RNA, 단백질, 유기용매 등이 존재하면 흡광치에 영향을 미치게 된다. DNA와 단백질의 최대 흡광도는 각각 260 nm, 280 nm이므로 A260/A280의 값을 구함으로써 DNA 용액의 정제도를 구할 수 있다. 순수한 E. coli DNA는 A260/A280=1.95이며 이 비는 DNA의 전체적인 염기조성에 따라 변한다.
<실험방법>
1.적당량의 DNA 용액을 취하여 최종 부피가 1.0 ml가 되도록 TE 완충용액에 희석한다.
2. 260 nm와 280 nm 에서의 흡광도를 구한다.
3. 50 ㎍/ml = 1 A260 unit의 관계식을 이용하여 DNA 의 농도를 계산하고 260 nm/280nm의 비를 구한다.
<참고문헌>
1. Ro…
참고문헌
1. Rodriguez, R.L. and R.C. Tait (1983) In Recombinant DNA Techniques, An Introduction,pp. 42-47, Addison-Wesley Pub. MA, USA.Agarose gel electrophoresisAgarose gel electrophoresis는 단순하면서도 매우 효과적으로 0.5 ~ 25 kb의 DNA단資?분리, 확인, 정제할 수 있는 방법이다. Agarose gel의 양쪽 말단에 전류를 통하여 자기장을 만들면 음전하를 띤 DNA 분자는 양극으로 이동한다. 이동속도는 gel matrix에 의해 생성되는 마찰력에 의해 영향을 받으며 DNA의 크기에 의해 이동속도가 결정된다.
1. Ausubel F.M., R. Brent, R.E. Kingston, D.D. Moore, J.A. Smith, J.G. Seidman,and K. Struhl (1987) In Current Protocols in Molecular Biology,Wiley-Interscience, USA.
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I D : hakt******* Date : 2014-01-02 FileNo : 16052909 |
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