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Plasmid isolation
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자료설명
이번 실험은 박테리아로 할 수 있는 가장 기초적인 기법으로 구성되었다. 실험을 통하여 bacteria culture, plasmid prep.,enzyme treatment, gel-running 등의 기법을 배우고 이를 실제의 연구 목적에 이용할 수 있도록 숙지한다.
목차/차례
- 1. preface
- 2. method
- 3. process
- 1) Bacteria Culture
- 2) Plasmid Prep.
- 3) 전기영동
- 4. sequence
- 5. Discussion
- 6. conclusion
본문/내용
미리 준비한 박테리아를 증식시킨다. 이 박테리아에는 재조합 plasmid가 이미 들어 있는 상태이다. 박테리아를 배양하여 충분한 양의 plasmid가 확보되면 prep. 한다. 추출한 plasmid는 관찰하기 용이하도록 제한효소 처리를 할 수 있다. 이 plasmid를 전기영동으로 관찰한다.
3. process
1) Bacteria Culture
실험에 사용한 박테리아는 가장 많이 사용하는 E.coli 이다. 최적 상태에서 doubling time은 20 분 정도이고 배양한지 11시간 정도가 지나면 stationary phase에 이르러 그 수가 약 109개 정도가 된다. Tube에 LB 미디어를 2000㎕를 넣고 pipet으로 콜로니 하나 (E.coli , plasmid는 PCH 110) 를 조심스럽게 떠내어 tube에 넣고 확실히 들어가도록 잘 흔든다. 37 C 정도로 맞춰진 shaking-인큐베이터에서 11～12 시간 배양시킨다.
2) Plasmid Prep.
배양한 박테리아에서 plasmid DNA를 추출하는 과정이다. 기본적으로 원심분리가 가장 많이 이용된다.
① 박테리아가 배양된 미디어에서 pipet으로 1400㎕를 추출하여 1.5㎖ tube에 넣는다.
② 원심분리 (14000 rpm, 2 min) 하여 E.coli cell만 바닥에 가라앉힌다.
③ 미디어는 따라 버리고 남은 …
3. process
1) Bacteria Culture
실험에 사용한 박테리아는 가장 많이 사용하는 E.coli 이다. 최적 상태에서 doubling time은 20 분 정도이고 배양한지 11시간 정도가 지나면 stationary phase에 이르러 그 수가 약 109개 정도가 된다. Tube에 LB 미디어를 2000㎕를 넣고 pipet으로 콜로니 하나 (E.coli , plasmid는 PCH 110) 를 조심스럽게 떠내어 tube에 넣고 확실히 들어가도록 잘 흔든다. 37 C 정도로 맞춰진 shaking-인큐베이터에서 11～12 시간 배양시킨다.
2) Plasmid Prep.
배양한 박테리아에서 plasmid DNA를 추출하는 과정이다. 기본적으로 원심분리가 가장 많이 이용된다.
① 박테리아가 배양된 미디어에서 pipet으로 1400㎕를 추출하여 1.5㎖ tube에 넣는다.
② 원심분리 (14000 rpm, 2 min) 하여 E.coli cell만 바닥에 가라앉힌다.
③ 미디어는 따라 버리고 남은 …
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I D : lmyc****** Date : 2013-12-30 FileNo : 16052901 |
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