MTT assay

1.cytotoxicity test (세포 독성 테스트) 독성이 있느냐 없느냐를 테스트 한다. 독성이 있는 물질은 정상 cell과 암 cell에 투여 했을 때 cell이 살아있는 비율 또는 수 보고 효과 있는 물질인지 아닌지를 구별하는 것이다. 독성이 있으니까 당연히 정상 cell과 암 cell이 전부 죽겠지만 독성분의 농도를 낮춰 투여 했을 때 비교적 정상 cell이 많이 살고 암 cell이 많이 죽는 다면 항암 효과가 있다는 뜻 2. MTT assay (reduce) MTT(yellow) --------------------> MTT - formazan(purple) ↑ Succinic dehydrogenase 원리 TCA cycle에서 cycle이 돌 때 succinate에서 fumarate로 가는 과정에서 succinic dehydrogenase 가 필요하고 이 cycle에 관여한다. succinate → Fumarate로 가는 과정에서 MTT를 투여하는 데 여기에서 MTT와 succinate dehydrogenase가 반응해서 formazan을 형성한다. formazan을 형성하면 cell이 살아 있다는 것이고 보라색을 띤다. 살아있는 cell이면 TCA cycle을 다 돌고 이 cycle이 계속 반복되고 죽어있는 세포는 TCA cycle을 돌지않고 노란색을 띤다. 3. MTT methods plating ↓48시간 약물 투여 ↓72시간 ELISA Reader plating ① flask에 있는 cell을 배양하기 위해서 우선 subculture한다. ② medium, PBS, Trypsin - EDTA를 냉장고에서 꺼내어 37℃ water bath에 서 15～20분간 데운다. ③ 실험준비를 한다. ④ incubater에서 flask를 꺼내온다. ⑤ flask 안의 medium을 suction으로 뽑아낸다. ⑥ 75㎠ flask이므…
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