효소반응

(가) Somogyi법 ① 시약 A=Rochelle염 90g을 Na3PO4·12H2O 225g을 증류수 약 600㎖에 녹이고, 이것에 CuSO4·5H2O 30g을 물 약 100㎖에 녹인 것을 첨가하고 또한 KIO3 3.5g을 소량의 물에 녹여 첨가하여, 전량을 1ℓ로 한다. (겨울에는 Na3PO4가 석출하므로, 이것을 방지하기 위해서 30。C로 보존하여 둔다.) ② 시약 B=K2C2O4·H2O 90g,KI 40g을 증류수에 녹여 1ℓ로 한다. ③ 시약 C=2N H2SO4용액 1ℓ ④ 시약 D=0.05N Na2S2O3 용액 5ℓ(적정용). Na2CO3 약 0.5g/ℓ을 첨가하여 두면 안정도가 증가한다. ⑤시약 E=1% 전분용액 100㎖ 1g의 가용성전분에 클로로포름 몇방울과 소량의 물을 가하고, motar로 잘 반죽 혼합하 호상으로 만든 것을 100㎖의 열탕에 가하고, 2～3분 끊여 여과한다. (나) 분석방법 100㎖ 삼각flask에 시약 A를 10㎖ 넣고 당용액(5～25㎎의 환원당을 포함)과 증류수를 첨가하여 30㎖로 만든다. 그리고나서 가열하여 2분 이내에 끓이고, 정확히 3분간 계속 끓인 후, 신속히(가능하면 흐르느 물에서)냉각한다. 이 때 진탕하는 것은 피한다. 냉각 후, 시약B 10㎖, 시약C 10㎖ (C액 10㎖는 정확하지 않아도 좋다.)를 신속히 첨가하여 잘 진탕 혼합하고, 즉시 시약D로 적정한다. 지시약으로 시약E를 사용한다. Sample중의 환원당량은 다음식으로 구한다. s=s`(N-N`)f s : sample 중에 포함된 전환원당량 s`: 각종 단당류의 0.05N NaS2O3 1㎖에 상당하는 량 glucose에서 s` = 1.449 fructose에서 s`=1.44 N : 동일조건에서 증류수로 시행한 시약 D 용액의 적정량 N` :당을 포함한 용액에 대한 적정량 f : 시약 D의 factor