[의학,약학] [미생물실험] PURIFICATION OF PLASMID DNA(bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해)

PURIFICATION OF PLASMID DNA 1. subject bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해한다. 2. introduction 가. plasmid세균세포내에서 염색체와 독립적으로 존재하며 증식할 수 있는 환형DNA. 모든 플라스미드는 복제 개시점이 될수 있는 적어도 한 개의 DNA염기서열을 가지며 큰 플라스미드는 자체에 복제 효소를 가지기도 한다. 세균의 생존에 필수적인 유전정보를 가지고 있는 것은 아니지만 플라스미드에서 약제에 대한 저항성을 가진 내성인자,세균의 자웅을 결정하는 성결정인자등이 발견되고 있다. 제한효소로 고리를 끊은 뒤, 진핵생물의 DNA를 삽입하여 잡종 플라스미드를 만들어도 세균안에서 정상적으로 작동하고 증식하며, 이를 이용한 유전자 재조합을 통해 유용한 단백질을 얻을 수 있다. 나. vector필요한 유전자를 잘라내어 플라스미드에 삽입한 후 재조합된 플라스미드를 세균안에 집어 넣는다. 숙주 내 플라스미드의 증식에 따라서 필요한 유전자가 복제되고 유용한 물질들이 합성된다. 이때 플라스미드는 유전자를 운반하는 역할을 하기 때문에 벡터 (vector 운반체)라고 불려진다. 세균은 숙주라고 부른다. 다. pGEM-T vectror 1) T-vectorT-vector는 PCR을 마친후 증폭된 DNA의 절편을 보관이나 다른 용도에 편하게 쓸 수 있도록 만든 것이다. vector가 주로 circular form의 plasmid인데 비해 이것은 직선형이다. PCR 결과물을 T-vector와 연결하여 circular form으로 만들어 준 후에 E.coli에 transformation하는 방법으로 이용한다. T-vector는 이름에서 볼 수 있듯이 직선형 DNA의 양끝에 overhang(DNA가 2가닥인데…
1) T-vectorT-vector는 PCR을 마친후 증폭된 DNA의 절편을 보관이나 다른 용도에 편하게 쓸 수 있…