[자연과학] 미생물실험 - Gram(그람) 염색

식품 미생물 및 실험 - Gram 염색 1. 실험 목적 및 원리 ∞ 균을 염색하여 색깔로 Gram 양성균과 음성균을 구분한다. ∞ 세균의 세포벽에 착색된 crystal violet이 탈색제에 의해 저항성을 나타내어 보라색을 띠면 양성균이라 하고, crystal violet이 탈색된 후 대조 염색제인 safranin으로 염색되어 빨간색을 띠는 것을 음성균이라 한다. 양성균 세포벽에는 teichoic acid가 존재하여 탈색제로부터 보호 작용을 하여 crystal violet이 남아있게 된다. 그러나 너무 오래 탈색하거나 old culture된 세균은 거의 Gram 음성균으로 나타나기 쉬우므로 특히 탈색에 주의하여야 한다. 2. 재료, 시약, 기구 Escherichia coli (gram 음성간균), Staphylococcus aureus (gram 양성구균), Crystal violet(1차 염색제), Gram iodine(착색제), 95% ethanol(탈색제), Safranin(2차 염색제), 슬라이드 글라스, 백금이, 멸균증류수, 알코올램프, 일회용장갑, 피펫, 초시계 등 3. 실험 방법 ① 도말- 슬라이드글라스에 멸균 증류수 한 방울을 떨어뜨리고 균(E.coli)을 백금이로 취해서 도말 ② Air Dry- 약한 불꽃 위에서 표본을 좌우로 흔들면서 건조시킴 ③ Fixing- 도말면을 위로 하여 약한 불꽃 중에서 3번 정도 서서히 통과 ④ Straining- Crystal violet을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 보라색으로 염색 ⑤ Washing- 도말면을 아래로 하여 약하게 물을 틀어 염색액이 묻어나오지 않을 때까지 세척한 뒤 물기를 제거 ⑥ Coloring- Gram iodine을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 색을 착색시킴 ⑦ Washing- 위와 동일한 방법으로 세척한 뒤 물기를 제거 ⑧ Decolorizing- 95% ethanol을 떨어뜨리고 5~10초간 방치하여 탈색 ⑨ Washing ⑩ Straining- Safran…
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