[의학,약학]생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험

생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험
`실험 방법`
-DNA 추출

1. Solution 1

2. Solution 2

3. Solution 3

4. Washing

5. Elution

-PCR
1. PCR tube에 dNTPs buffer 4 μl와 reaction buffer 5 μl를 넣는다.
2. Template DNA 1 μl를 넣고 forward, reverse primer를 각각 0.5 μl 씩 넣는다.
3. DNA polymerase 1 μl를 넣는다.
4. 증류수 37 μl를 넣고 잘 pipetting 해 준다.
5. PCR machine의 well에 tube를 넣고 반응시킨다.
`실험 재료`
-PCR
DNA polymerase, Template DNA, primers, dNTPs mixture, Reaction buffer, PCR tube, 증류수, pipette tip, pipette
`miniprep의 원리`
Plasmid DNA extraction
Plasmid를 분리해내는 방법은 추출량에 따라 miniprep, midiprep, maxiprep 이 있다.
기본적인 원리는 세균의 Cell wall을 Alkali lyssis method를 통해 깨부수고 DNA를 분리 한 후 다시 Chromosomal DNA와 plasmid DNA 중 plasmid만을 분리하는 것이다.
실험에 사용한 용액의 역할을 알아보도록 하자.
Solution I
Solution II
Solution III
50mM Glucose
25mM Tris-Cl (pH 8.0)
10mM EDTA …