[자연과학][공학생물학] 브래드포드 단백질 정량법[The Bradford Method for Protein Quantitation]

공학 생물학 및 실험 레포트

1. 제목

The Bradford Method for Protein Quantitation

2. 준비물

Bradford 시약
Protein Standard Solution
Spectrophotometer와 Quartz cuvette, Pipet
Milk, 증류수
ep tube
BSA Protein(standard)

3. 실험 과정

Milk를 증류수를 이용하여 , , 원액의 비율로 dilution한다.
Bradford 시약을 1㎖씩 ep tube에 7개 넣는다.
Standard Soulution을 0㎕, 2㎕, 4㎕, 6㎕씩 tube에 넣는다.
diluted milk를 5㎕씩 ep tube에 넣는다.
거품이 나지 않도록 천천히 뒤집으며 섞는다.
각각 시료를 1.5㎖ cuvettes에 1㎖씩 넣는다.
7.595㎚ 파장에서 Standard Solution의 흡광도를 측정한 후 기록한다.
나머지 시료의 흡광도를 측정한 후 기록한다.

4. 서론

Bradford Method는 산성 용액에서 불그스름한 갈색을 띄는 Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG) 염료의 흡광도 변화를 측정한다. CBBG가 free dye형태로 있을 때의 최대 흡광은 465㎚(빨강)이지만, 단백질의 아미노산과 결합하여 anionic form일 때의 최대 흡광도은 595㎚(파랑)인 점을 이용한다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. CBBG의 음이온이 단백질의 양…

5. 결과

Standard curve
diluted milk 단백질 농도

1) 비율의 diluted milk : 0.166 〓 166

2) 비율의 diluted milk : 1.79 〓 1790

3) undiluted milk : 6.986 〓 6986

6. 토의 및 건의사항