[공학]실험보고서 - Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동

Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동 1. Purpose E.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여 전기 영동한다. 2. Introduction Plasmid DNA 분리의 원리 주로 mini-prep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으 로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. Alkali lysis method 의 핵심 원리는 다음과 같다. 1. 세포벽을 깬다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다. 2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 용액에 DNA 를 노출시킨다. SDS라는 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 된다. 이때 바로 alkali 용액에 노출된 DNA는 모두 denature 된다. 그러나 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 그다지 심각하게 되지 않는 성질을 이용하는 것이다. 3. pH를 급격히 7.0까지 복구시키면 크기가 작고 supercoile…
3. pH를…