[의학,약학]유전자 분석 - sequencing을 이용한 ADH와 ALDH2의 유전자형 분석과 polymorphism 발굴

Abstract
이번 실험은 사람의 DNA에서 특정 유전자(ADH, ALDH2)에 대하여 유전적 기능을 특징짓는 SNP를 RFLP를 통해 확인하고 sequencing을 통해 정확한 sequence를 찾아내어 여러 sample DNA들을 Data base의 reference와 비교 분석해보는 실험이었다. 먼저 18개의 준비된 sample DNA들은 RFLP를 이용해 ALDH2 유전자가 들어있는 DNA 부분에 대해 제한효소(MboⅡ)를 반응시켜줘 제한효소가 반응하는 site에 존재하는 SNP를 확인했다. 준비된 DNA는 그 양이 많지 않기 때문에 primer를 만들어줘 필요한 부분(ALDH2가 들어있는 약 135bp size로 만들 수 있는)이 들어가게 해주고 tochdown PCR을 실행한다. 그 후, 제한효소와 하룻밤동안 충분히 반응시켜준 뒤, 4% agarose gel에 전기영동시켜주면 3가지 형태의 band가 나오게 된다`Fig 2.`. 여기서 큰 size의 band만 뜬 것은 ALDH2(Lys/Lys)을 뜻하는 것으로 제한효소에 의해 잘리지 않았다는 것을 의미하며 작은 size의 band만 뜬 것은 ALDH2(Glu/Glu)를 의미하는데, 이것은 두 DNA가닥이 모두 제한효소에 의해 잘렸기 때문인 것이다. 마지막으로 두 band 모두 나타나는 것은 heterotype으로서 ALDH2(Glu/Lys)을 의미하게 …