[의학,약학]세균배양 - 생균수 측정 실험보고서

1. 실험 목적

세균 배양액을 직접 agar plate에 도말하면 한 개의 세포가 증식하여 생긴 수 만개의 작은 집락(colony)이 형성되는데, 이것을 그 수를 세기에 너무 많을 뿐만 아니라 집락과 집락이 중복되어 정확한 수를 셀 수가 없다. 따라서 배양액의 희석을 통하여 plate내에 적절한 수(30～300개)의 집락이 고루 분포되도록 하여서 대략적인 생균수를 측정하기 위해서 이 실험을 한다.
생균수 검사는 식품 중에 함유되어 있는 일반 세균수를 측정하여 식품에 미치는 영향 정도를 말해주므로 식품의 부패정도나 신선도 및 오염도를 측정할 때 이용된다.

2. 실험 재료

알코올램프 , 삼각 플라스크 , 김치원액(김치B) , 생리식염수(NaCl 0.85 %) ,
피펫필러[200㎖ , 1000㎖ , 100㎖] , 피펫팁, Clean bench , eppendorf tube ,
rack , 스미어봉 , 알코올 , BCP배지 1개 , MRS배지 5개
* MRS 배지 성분 *
Approximate formula pe-rliter
Proteose Peptone NO.3 ? 10.0g
Beef Extract ? 10.0g
Yeast Extract? 5.0g
Dextrose ? 20.0g
Polysorbate 80? 1.0g
Ammonium citrate? 5.0g
Maganese sulfate ? 0.05g
Dipotassium phosphate? 2.0g
Agar? 15.0g

3. 실험 방법

(1) 희석하기

① 살균소독된 클린벤치 앞에 앉아 1000㎖짜리 피펫필러에 피펫팁을 끼우고 8개의 eppendorf tube에 등장액 상태의 생리 식염수 0.9㎖를 각각 넣는다.

…

② 200㎖짜리 피펫필러에 피펫팁을 끼우고 김치국물B 0.1㎖를 빨아들여 첫 번째 eppendorf tube에 넣고 뚜껑을 닫아 rack에 꽂아두고 여기에 사용된 피펫팁을 쓰레기통에 버리기 도 한다.

③ 생리식염수 0.9㎖가 담겨진 두 번째 eppendorf tube에 새로운 피펫팁을 끼우고 첫 번째 eppendorf tube 용액에서 0.1㎖를 빨아들여 두 번째에 넣는다.

④ 3번째 eppendorf tube에는 두 번째 용액 0.1㎖를 넣고 4번째 eppendorf tube에는 세 번

⑤ 1.0㎖씩 담긴 eppendorf tube 8개를 rack에 꽂아둔다.

① 100㎖짜리 피펫필러에 피펫팁을 끼우고 세 번째 eppendorf tube 용액에서 50㎕(마이크 로미터)를 빨아들여 평판배지 위에 뿌리고 사용한 피펫팁은 쓰레기통에 버린다.

② 용액이 스며들기 전에 얼른 스미어봉으로 agar가 찢어지지 않게 슬며시 밀어주며 평판 배지 곳곳에 세균이 퍼지도록 골고루 밀어준다.

③ 평판배지 위의 용액이 다 말라가면 스미어봉이 잘 밀어지지 않는데 이때까지 밀어준 다 음 평판배지는 뚜껑을 덮어 거꾸로 둔다.

④ 4～8번째 eppendorf tube도 3번째 eppendorf tube용액과 같이 평판배지에 0.1㎖씩 옮겨