제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동

[제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동]

1. 실험 제목

이번 실험에서는 8주차 실험에서 추출해낸 DNA를 제한 효소를 사용하여 여러 개의 DNA 조각으로 분리한 후, 전기영동을 통하여 원하는 DNA 분자가 유입되었는지를 확인한다.

2. 배경 이론

효소
공급원
인식 서열
잘린 모습
EcoRI
Escherichia coli
5`GAATTC
3`CTTAAG
5`-G AATTC-3`
3`-CTTAA G-5`
PstI[45]
Providencia stuartii
5`CTGCAG
3`GACGTC
5`-CTGCA G-3`
3`-G ACGTC-5`
이번 실험에는 DNA를 제한 효소로 절단하는 과정이 포함되어 있다. 제한 효소는 원래 세균이 침투한 외래 DNA를 변형 및 파괴시키기 위하여 존재하는 효소이다. 그러나 이 제한 효소는 그 세균의 DNA도 절단할 수도 있기 때문에 그것을 방지하기 위해 세균은 자신의 DNA에 메틸화(methylation)을 하는 등의 방법을 통해 자신의 DNA를 보호한다. 제한 효소는 이중 나선 구조로 된 DNA의 회문식 염기서열, 즉 앞으로 읽으나 뒤로 읽으나 염기서열이 같은 모양을 하고 있는 특징적인 염기서열을 인식하여 절단한다. 잘린 후의 DNA 말단의 모양은 두 종류가 있다. 말단이 엇갈리게 잘린 말단을 점착…(생략)