본문/내용
악골과 경조직(Calcium Phosphate Lab)
Determination of Calcium & Inorganic Phosphate content in Blood Plasma and Bone
Ⅰ. Introduction
칼슘과 인은 체내에 가장 많이 존재하는 무기질 중 하나이며 이들은 여러 가지 중요한 역할을 수행한다. 혈중 농도를 일정하게 유지하는 것은 매우 중요한 일 중 하나이며 우리 몸에는 이를 조절하기 위한 여러 기전들이 서로 맞물려 있고, 칼슘과 인이 부족할 경우 이를 보충하는 가장 주된 수단은 뼈로부터의 보충이다. 골의 무기 성분 함량은 약 65%(wt%)이며, 결정학적으로 수산화인회석[Ca10(PO4)6(OH)2]을 기본으로 하는 구조이며, 인체내 칼슘과 인의 99%와 85%를 함유하고 있다.
혈장 칼슘농도는 8.8~10.4mg%(2.2~2.6mM)의 범위 내에서 엄격하게 유지된다. 혈장 칼슘은 여러 형태로 존재하는데, 생리학적으로 활성형인 이온형태의 칼슘은 약 5mg으로 전체 칼슘의 약 50%를 차지하며, 약 4mg의 칼슘은 혈장단백질인 albumin(3mg) 또는 globulin(1mg)과 결합한 형태로 존재하는데 이 칼슘은 확산될 수 없는 칼슘이다. 또한 약 1mg의 칼슘은 작은 음이온과 복합체를 이루어 존재하는데 이들은 이온형태의 칼슘과 더불어 확산될 수 있는 칼슘이다.
정상 성인의 혈장에는 총 12~14mg의 인이 함유되어 있는데 이중 3-4mg는 무기인산형태로, 0.5mg는 phosphate ester 형태로, 5~10mg는 인지질 형태로 존재한다. 칼슘과 달리 혈장 내에 존재하는 인의 약 85%가 사구체를 통해 확산됨으로써 빠져나갈 수 있다. 혈장 내 무기인산의 대부분은 orthophosphate 형태로 존재하는데, HPO42-와 H2PO4-가 약 4:1의 비율로 존재하여 대부분이 2가 이온 형태로 존재함을 알 수 있다.
Ⅱ. 관련 이론
…
Ⅲ. Materials & Methods
① Introduce into a centrifuge tube 1ml of sample, 3ml of D.D.W and 1ml of 4% ammonium oxalate solution.
② Mix thoroughly & Stand for 30 min or longer & Mix the contents again.
③ Centrifuge for 5 min at 1500 rpm & Pour off the supernatant carefully.
④ Wash with 4ml of 0.5% ammonium hydroxide soln.
⑤ Centrifuge for 5 mi at 1500 rpm & Pour off the supernatant carefully.
⑥ Add 2ml of 1N sulfuric acid & Mix thoroughly.
⑦ Place the tube in a boiling water for 1 min.
⑧ Titrate with 0.01N KMnO4 to a definite pink color which persists for 30s at least.
① Introduce 1ml of sample or blank solution into tubes.
② Add 0.5ml of 5N sulfuric acid.
③ Add 1ml of acid molybdate reagent.
④ Mix thoroughly & Add 0.1ml reducing agent(ANSA)
⑤ Add 2.4 ml of D.D.W. & Mix well.
⑥ Read absorbance at 660nm after 10 min.
Place the tube in a boiling water for 1 min.
⑧ Titrate with 0.01N KMnO4 to a definite pink color which persists for 30s at least.
? Determination of inorganic phosphate (Bone : 1/100 희석, Blood : 1/3 희석)
① Introduce 1ml of sample or blank solution into tubes.
② Add 0.5ml of 5N sulfuric acid.
③ Add 1ml of acid molybdate reagent.
④ Mix thoroughly & Add 0.1ml reducing agent(ANSA)
⑤ Add 2.4 ml of D.D.W. & Mix well.
⑥ Read absorbance at 660nm after 10 min.
Calcium
방울수
KMnO4 부피 (ml)
Bone
50
2.130
Serum
5
0.174
Phosphate
O.D
KH2PO4 농도(μmol/ml)
Bone
0.217
0.338
Serum
0.126
0.199
Ⅵ. Results
Ca 적정 P 적정
골 : 177.5 mg 골 : 17.45 mg
혈장 : 0.09 mg/ml 혈장 : 0.0483 mg/ml
Ca/P Ratio
무게비 : Bone : 10.17, Serum : 1.86
몰비 : Bone : 7.63 Serum : 1.40
※ 적정반응의 반응식(2KMnO4 + 5CaC2O4 + 8H2SO4 -> K2SO4 + 5CaSO4 + 2MnSO4 + 10CO2 + 8H2O)에서 생각해 보면 0.01N x 1/2 x 40 = 0.2mg/ml 로 KMnO4 1ml당 Ca 0.2mg이 반응한다. Phosphate의 경우 위에서 구한 X: 의 농도, Y: O.D. 값일 때 Y = 0.6736X - 0.0