크로마토그래피

크로마토그래피

1.실험목적

정상과 역상 크로마토그래피에 의한 색소의 분리를 통하여 크로마토그래피의 원리와 극성의 개념을 배운다.

2.실험이론

크로마토그래피는 정지상과 이동상을 사용하여 시료들이 섞여 있는 혼합액을 이동속도 차이를 이용하여 분리하는 방법이다. 예를 들어, 검은 수성 사인펜으로 글씨를 쓴 종이에 물이 묻어 사인펜이 번지는 경우가 있는데, 번진 부분은 푸른색, 붉은색, 노란색 등 여러 색깔이 서로 다른 위치에 퍼져 있는데, 이것은 각 색소들의 이동속도가 서로 다르기 때문이다. 이같은 종이크로마토그래피에서 이온교환크로마토그래피까지 다양한 종류가 있다. 크로마토그래피의 원리 크로마토그래피는 이와 같이 시료들이 섞여있는 혼합액을 이동상과 함께 정지상에 흘려보내면 시료의 특징에 따라 통과하는 속도가 다르다는 점을 이용해 시료를 분리해내는 방법이다. 크로마토그래피(TLC)는 종이 크로마토그래피(PC)와 더불어 판 크로마토그래피 (plane chromatography)의 일종으로서 정지상으로 미세한 흡착제 입자를 얇게 입힌 정지상 판(TLC)를 사용한다. 즉, TLC판은 실리카겔이나 알루미나등을 유리…(생략)

3. 실험기구

4.실험방법

① 준비된 두 개의 비커에 여과지를 병풍모양으로 접어서 바닥에 위치시키고 전개용매를 부은 다음 알루미늄 호일로 뚜껑을 만들어 덮는다.

② TLC판을 깨끗한 종이 위에 올려놓고 한쪽 바닥으로부터 약 1.0cm 떨어진 지점에 하단과 나란한 선을 연필로 긋는다.(펜은 사용하지 말 것)

③ 출발점에 표시된 연필선을 따라 일정한 간격으로 각각의 모세관을 이용하여 순수한 용액과 혼합용액의 반점을 찍는다. 이 때 반점의 직경이 약 2mm 이상으로 너무 크지 않도록 주의한다. (한개의 TLC판에 세 개의 용액을 모두 묻혀서 실험하는 것이 각각의 TLC판에 한개씩 묻혀서 실험하는 것보다 효과적이다.)

④ TLC판의 용매가 모두 증발하도록 약 1~2분간 방치한 다음, 전개용액이 들어 있는 비커 안에 조심스럽게 위치시킨다. (반점이 용매에 잠기면 안 된다.)

⑤ 알루미늄 호일로 비커의 윗부분을 빈틈없이 잘 싼다.

⑥ 전개액이 TLC판 윗부분으로부터 1cm정도까지 올라왔을 때, TLC판을 비커로부터 꺼내어 용매선을 연필로 표시하고 말린다. (용매가 TLC판 상단을 지나서는 안 된다.)

⑦ UV램프(254nm) 하에서 관찰하여 반점의 테두리를 연필로 그린다.

⑧ 각 반점이 이동한 거리와 전개용매가 이동한 거리를 자로 재어서 Rf값을 결정한다.

5.주의사항