[자연과학] 생물의 실험 - 식물의 호르몬

I. 서론

1. 실험 제목: 식물의 호르몬

2. 실험 목표: 이번 실험에서는 2가지 종류의 식물 호르몬 Auxin과 BR(Brassinosteroid)가 식물에 끼치는 영향을 관찰해보았다.

3. 배경 지식

1) 기내 배양

식물기내배양(器內培養, In vitro plant culture)은 식물을 토양 등의 외부 환경과 차단된 무균상태에서 재배하는 방법이다. 대표적인 예로 조직배양이 있다.

2)Auxin과 BR

옥신은 세포벽신장, 굴광성, 굴중성, 정단우세현상, 배발생패턴 조절, 줄기세포군유지, 발근 촉진, 기관 형성등 다양한 식물의 생장반응에 관여하는 호르몬으로, polar transport로 식물 아랫부분을 향해 움직인다. 아미노산의 하나인 트립토판(Trp)으로부터 생합성 되고, 옥신의 종류 중 Indole-3-acetic acid (IAA)가 천연 옥신으로 자연 상태에서 가장 많으며 그 외에 합성 옥신으로 NAA, 2,4-D등 다양한 종류가 있다. 반면에, Br은 동물의 스테로이드와 유사한 화학구조를 갖고 있는 스테로이드호르몬이다. 세포신장, 화분관(Pollen tube growth)신장, 발아, 관다발조직 및 뿌리털 형성, 스트레스 저항성 등 식물의 여러 가지 생장과 …(생략)

4. 실험 재료

5. 실험 방법

1) 기내배양용 무균배지(애기장대 배양용) 만들기

① clean bench를 70% EtOH로 닦고 자외선을 켜두어 미리 소독된 clean bench에 페트리 디쉬를 둔다. (clean bench가 최소한 실험 1시간 전부터는 소독되어 있어야 한다.)

② (5인 기준) 삼각플라스크에 MS power를 0.55g (0.5X), plant agar 2.5g (1%), 250ml 1차 증류수를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 뚜껑을 호일(2겹)로 막은 다음 멸균 테이프을 부착한다.

③ 압력솥을 이용하며 압력이 최대가 된 상태부터 15분간 끓여 멸균한다.

④ 멸균된 배양배지를 압력솥에서 꺼내 삼각플라스크 외부를 70% EtOH로 닦은 다음 clean bench에서 약 20분정도 식힌다. (약 50-60℃ 정도)

⑤-1: Control 배지는 아무것도 첨가하지 않고 90mm x 20mm plate에 붓는다. (250ml로 약 5~6개 plate 부을 수 있음)

⑤-2: +Auxin 배지는 1000X Stock(1mM)으로 제공된 NAA를 250ul (250ml, 5인기준)넣고 잘 흔들어 섞은 후 90mm x 20mm plate에 부어 굳힌다.

⑤-3: +BR 배지는 1000X Stock(1mM)으로 제공된 Brassinolide를 250ul (250ml, 5인기준)넣고 잘 흔들어 섞은 후 90mm x 20mm plate에 부어 굳힌다.

⑤-4: 배지를 빨리 식히기 위해서, plate를 clean bench안에 한 층으로 쌓은 후 뚜껑을 열어놓은 후 clean bench 문을 닫은 후 UV를 켜놓고 말린다.

2) 애기장대 종자멸균법

① 반으로 접었다가 펴서 선을 낸 A4 용지 위에 적당량(1인당 약 20여개)의 애기장대 종자들을