[레포트] 미생물학 실험 레포트- 그람염색시험

미생물학 실험 레포트

1) Gram staining 방법

이론
그람염색은 세균학에서 가장 많이 사용되고 있는 염색법이다. 그람양성균과 그람음성균을 구별하는 염색이기 때문에 differential stain이라고도 한다. 1884년 C. Gram에 의해 처음 창안된 염색법으로 두 가지의 세균으로 분류된다 . 이후 여러 가지 방법이 제안되었으며 Hucker의 방법과 Burke의 방법이 일반적으로 사용된다. 여기에서는 전자를 위주로 설명하였다.
그람 염색 결과 자주색으로 염색되는 세균은 그람양성이며 분홍색으로 염색되는 세균은 그람 음성이다. 양성과 음성은 전기적 성질과는 무관하며 단순히 형태학적 차이를 나타내는 용어이다.
그람양성균과 음성균이 서로 다르게 염색되는 것은 근본적으로 세포벽 구조가 다르기 때문이다. 세균의 세포벽은 크기와 형태를 유지하게 하며 또한 삼투압에 의한 세포 파열을 방지하는 역할을 한다. 세포벽에는 펩티도글리칸(peptidoglycan)이라고 하는 물질이 있기 때문에 아주 단단하다. 그람양성균의 세포벽은 여러 층의 펩티도글리칸 층이 두껍게 감싸고 있는데 세포벽의 약 80-90%가 펩티도글리칸이다.
반면 그람음성균의 세포벽은 펩티도글리칸층이 한 겹으로 매우 얇으며, 이층 외부에는 인지질, 리포폴리사카라이드, 리포프로테인 등으로 구성된 외막(outer membrane)이 감싸고 있는 형태로 세포벽이 이루어져있다. 세포벽의 10-20%만이 펩티도글리칸이다. 이러한 세포벽 구조의 차이로 인한 그람 염색의 차이는 세균을 분류하는 가장 기본적인 기준이 되었다.
방법
* 제 1 단계 - 크리스탈 바이올렛 염색
염기성 색소인 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하면 그람 양성 및 음성균 모두 자주색으로 염색된다.
* 제 2단계 - 착색 단계
1단계에서 염색된 세균에 요오드 용…

2) Catalase의 원리

A. Hydrogen peroxide는 호기성 당분해 산화과정의 최종산물로서 세포 독성작용이 있으므로 세포내에 축적되면 세포가 죽게된다. 그러므로 세균들은 catalase나 peroxidase를 이용하여 hydrogen peroxide를 분해한다.

B. Catalase는 hemoprotein으로서 한 분자당 3가 철이온 (Fe+++)이 4개가 있으며 효소활성시에는 산화 상태로 존재한다. 일부 세균은 Iron을 함유하지 않는 catalase를 가지고 있으며 이러한 catalase를 pseudocatalase라 한다. 전형적인 catalase 효소는 과산화수소를 가수분해하고 산에 강하나 pseudocatalase는 산에 약하다. Catalase는 대부분의 cytochrome을 함유한 호기성 및 통성 혐기성 세균에 존재하지만 연쇄구균을 포함한 일부 균종에는 없다. Catalase 효소는 Hydrogen peroxide를 가수분해하여 물과 산소를 만들며 cytochrome system이 없는 세균의 대부분은 catalase 효소가 없으므로 과산화수소를 가수분해하지 못한다.

C. 대부분의 혐기성 세균은