[자연과학] Enzyme Activity의 측정

Enzyme Activity의 측정 1. 실험제목 : Enzyme Activity의 측정 2. 실험일시 : 2009. 10. 29 3. 실험목적 : 단백질을 분리해 나가는 과정 중에 원하는 단백질이 얼마나 잘 분리 되었는가를 알아보기 위해서는 단백질의 함량과 생물학적 활성을 측정합니다. 또 비활성도를 측정하여 단백질의 분리 정도(순도)를 알아보는데, 이 과정이 바로 Enzyme Activity의 측정입니다. 4. 재료 및 기구 : ① ion chromatography 실험에서 분리 과정마다 추출해낸 5 가지의 시료와 튜브 - sephadex에 계란 흰자 넣어 chromatography한 20ml (흰자여과액) - 10ml에 TE buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (Tris 1용액) - 10ml에 TE buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (Tris 2용액) - 10ml에 탄산 buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (탄산 1용액) - 10ml에 탄산 buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (탄산 2용액) ② 피펫(10㎖, 200㎕) ③ Cuvette ④ Spectrophotometer ⑤ Tris-EDTA(TE) buffer, 0.05M ⑥ Phosphate buffer, 0.1M (0.2M sodium phosphate monobasic, 0.2M sodium phosphate dibasic) 5. 실험이론 및 원리 : 달걀흰자의 lysozyme은 세균의 세포벽을 가수분해 시킵니다. 따라서 lysozyme에 의해 쉽게 용해되는 Micrococcus lysodeikticus의 현탁액을 효소와 반응시켜 현탁액의 탁도가 감소하는 정도를 측정함으로써 lysozyme 활성을 측정합니다. 탁도 변화는 450㎚에서의 현탁액의 흡광도를 측정함으로써 알 수 있습니다. ▶ 효소활성의 단위 (Units) …
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