[자연과학] Enzyme Activity의 측정

Enzyme Activity의 측정

1. 실험제목 : Enzyme Activity의 측정

2. 실험일시 : 2009. 10. 29

3. 실험목적 : 단백질을 분리해 나가는 과정 중에 원하는 단백질이 얼마나 잘 분리 되었는가를 알아보기 위해서는 단백질의 함량과 생물학적 활성을 측정합니다. 또 비활성도를 측정하여 단백질의 분리 정도(순도)를 알아보는데, 이 과정이 바로 Enzyme Activity의 측정입니다.

4. 재료 및 기구 :

① ion chromatography 실험에서 분리 과정마다 추출해낸 5 가지의 시료와 튜브

- sephadex에 계란 흰자 넣어 chromatography한 20ml (흰자여과액)
- 10ml에 TE buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (Tris 1용액)
- 10ml에 TE buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (Tris 2용액)
- 10ml에 탄산 buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (탄산 1용액)
- 10ml에 탄산 buffer 10ml 처리 후 chromatography한 20ml (탄산 2용액)

② 피펫(10㎖, 200㎕)

③ Cuvette

④ Spectrophotometer

⑤ Tris-EDTA(TE) buffer, 0.05M

⑥ Phosphate buffer, 0.1M (0.2M sodium phosphate monobasic, 0.2M sodium phosphate dibasic)

5. 실험이론 및 원리 : 달걀흰자의 lysozyme은 세균의 세포벽을 가수분해 시킵니다. 따라서 lysozyme에 의해 쉽게 용해되는 Micrococcus lysodeikticus의 현탁액을 효소와 반응시켜 현탁액의 탁도가 감소하는 정도를 측정함으로써 lysozyme 활성을 측정합니다. 탁도 변화는 450㎚에서의 현탁액의 흡광도를 측정함으로써 알 수 있습니다.

▶…(생략)

6. 실험방법 :

① 시료를 희석하여 분당 0.02~ 0.04 범위내의 흡광도 감소를 나타내도록 Enzyme 농도를 맞춥니다.

② 세균현탁액과 phosphate buffer는 실온에 두고 효소액은 얼음에 보관합니다.

③ 0.1M phosphate buffer (0.2M sodium phosphate m