Plasmid의 특징 및 분리

1. Plasmid의 특징

Plasmid는 박테리아 세포 내에 독립적으로 존재하는 환형의 DNA 분자이다. 이들은 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고 있으며, 이들 유전자는 종종 숙주세균에 의해 보여지는 유용한 특징을 담당하고 있다. 예를 들어 항생제의 정상적인 독성농도에서 생존하는 능력은 항생제 저항성 유전자를 가진 plasmid가 세균 내에 존재하기 때문이다. 실험실에서 이러한 항생제 저항성은 종종 선별표지(Selection marker)로 이용된다. 모든 plasmid는 복제 개시점(origin of replication)이 될 수 있는 최소한 한 개의 DNA 염기서열을 갖고 있어서 세포 내에서 세균의 염색체와는 독립적으로 복제할 수 있다. 어떤 plasmid는 세균의 염색체 속으로 자신을 삽입시켜 복제한다. 이러한 plasmid (episome)들은 수많은 세포분열 동안 그 염색체 속에서 그 형태기 안정적으로 다음 세대로 유전된다. Plasmid의 크기는 1kb～250kb 이상까지 다양하다.
복제개수(copy number)란 하나의 세균세포 내에 존재하는 각각의 plasmid의 갯수이다(1개～500개 이상). 좋은 클로닝 운반체가 될려면 복제개수가 많은 것이 좋다.

2. 대장균으로부터 Plasmid의 분리

P…(생략)

1) 배양접시에서 자란 세포를 액체 배지에 대량 배양한다.

2) 자란 세포들을 원심분리하여 배지를 따라버리고 가라앉은 세포들에 solutionⅠ을 처리하여 세포들을 강하게 풀어준다.