Mini-prep 실험

3. 실험 과정 :

①. E-coly균을 spectrafuge로 5분간 600rpm으로 돌린 상층액만 따낸다.

②. solution 1을 300microℓ씩 주입후 vortexing 한다.

③. solution 2를 300microℓ씩 주입후 shaking 한다.

④. solution 3을 300microℓ씩 주입후 shaking 한다.

⑤. 얼음에 넣은후 5분정도 기다린다.

⑥. 14000rpm으로 10분정도 spectrafuge에 돌린다.

⑦. 다른 E-tube에 상층액 분리시킨다.

⑧. 분리된 상층액에서 550microℓ isopropyl Alchol로 Dna만 침전

시킨다.

⑨. 14000rpm으로 5-10분정도 spectrafuge를 돌린 후 상층액을 버리고 밑에 Dna만 남겨

놓는다.
. Etoh을 300microℓ 넣어 불순물은 걸러준다.
. 1분정도 spectrafuge에 넣고 돌린후 vaccum에 넣어 말린다.
. t.e buffer , RNASE를 넣어 불순물 제거해준다.
4. 실험 원리 : 기본적인 원리는 세균의 cell wall 과 cell membrane 을 부수고 plasmid DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA 와 plasmid DNA 를 구분하여 분리…(생략)