º»¹®/³»¿ë
Total cholesterol ÃÑ ÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ ÃøÁ¤ ½ÇÇè
1. Purpose
¿ì¸®°¡ ³óµµ¸¦ ¾Ë°í ÀÖ´Â Standard °ª°ú ÃøÁ¤À» ÅëÇØ ¾Ë¾Æ³½ sampleÀÎ Ç÷OÁßÀÇ ÃÑÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ ÃøÁ¤°ªÀ» °è»ê¹ý¿¡ ´ëÀÔÇÏ¿© ÃÑÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ·®À» °è»êÇØº»´Ù.
2. Materials & Reagents
°Ëü, cuvett, 1.5ml tube, Ç¥ÁØ¿ë¾×, ÃÑÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ ½Ã¾à, H2O, pipet, tip, waterbath,
spectrophotometer
3. Method
1) ÃÑ ÄÝ·¹½ºÅ×·ÑÀ» ÃøÁ¤Çϱâ À§ÇÑ cuvettÀ» (6°³) ÁغñÇÑ´Ù.
`` °Ëü 3°³ + Ç¥Áؽþà 3°³ (°Ëü¿Í Ç¥ÁؽþàÀº °¢°¢ °°Àº °ÍÀ¸·Î 3¹ø ÃøÁ¤ÇÑ °ÍÀÓ)
cuvett
mg/dl
¨ç
Standard ¹ø
300
¨è
Standard ¹ø
300
¨é
Standard ¹ø
300
¨ê
sample ¹ø
¨ë
sample ¹ø
¨ì
sample ¹ø
2) °Ëü(¶Ç´Â Ç¥ÁØ¿ë¾×) 10§¡ + ÄÝ·¹½ºÅ׷ѽþà 1§¢ ºñÀ²·Î °¢°¢À» 1.5ml tube¿¡ ³Ö´Â´Ù
(1.5ml tubeµµ 6°³¸¦ ÁغñÇÑ´Ù,)
3) waterbath¿¡ 37¡É 5ºÐ ¹ÝÀÀ½ÃŲ´Ù.
4) waterbath¿¡¼ ¹ÝÀÀ½ÃŲ 1.5ml tube¿¡ µé¾îÀִ ȥÇÕ¿ë¾× 1ml¸¦ cuvett¿¡ ¿Å±ä´Ù.
5) 500nm¿¡¼ spectrophotometer ÃøÁ¤ÇÑ´Ù.
6) ÃøÁ¤°ªÀ¸·Î °è»ê¹ý¿¡ ´ëÀÔÇÏ¿© ÃÑ ÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ·®À» ¾Ë¾Æº»´Ù.
4. Result
ÃÑÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ
ABS
bl¡¦(»ý·«)
°¡ À̹ø ½ÇÇè¿¡¼ ¾´ ¿ø¸®ÀÎ È¿¼Ò¹ýÀº ¿ì¸®°¡ ¾²´Â °Ëü(Ç÷¾×)¿¡ cholesterol Ester¿Í Free cholesterol ÀÌ·¸°Ô µÎ°¡Áö ÇüŰ¡ Á¸ÀçÇϹǷΠ±× °Ëü¸¦ äÃëÇÏ¿© cholesterol Ester ¸¦ ¸ðµÎ Free cholesterol ·Î ¹Ù²Û »óÅ¿¡¼ total cholesterol °ªÀ» ÃøÁ¤ÇؾßÇÑ´Ù. È¿¼Ò¹ý¿¡¼´Â cholesterol EsterÀÇ ester°áÇÕÀ» ²÷¾î Free cholesterol·Î ¹Ù²Ù¾î ÁÖ´Â cholesterol Esterase¸¦ ÷°¡ÇÏ°Ô µÇ´Âµ¥ À̸¦ ÷°¡ÇÏÁö ¾ÊÀ¸¸é Free cholesterol¸¸ ÃøÁ¤µÈ´Ù. µû¶ó¼ ÃÑ ÄÝ·¹½ºÅ×·ÑÀ» ÃøÁ¤ÇÏ´Â À̹ø½ÇÇèÀÌ Àß ¸ø µÇ°Ô µÈ´Ù.
ÀÌ ¿Ü¿¡µµ ÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ ÃøÁ¤¹ý¿¡´Â Liebermann-burchard ¹ÝÀÀ ¶Ç´Â Salkowski ¹ÝÀÀ°ú °°ÀÌ Æ¯À¯ÇÑ ¹ß»ö ¹ÝÀÀÀ» ÀÏÀ¸Å°¸ç ÄÝ·¹½ºÅ×·Ñ Á¤·®¿¡ ÀÌ¿ëµÇ´Â ¹æ¹ýÀÌ ÀÖ°í ¶ÇÇÑ ÃÊ»ê ¿¡Æ¿ ¿¡Åº¿Ã È¥ÇÕ¿ë¾×À¸·Î ÃßÃâÇÑ ¿ë¾×¿¡ FeCl3 ½Ã¾àÀ» °¡Çϸé Ǫ¸¥ »öÀÌ ³ªÅ¸³ª´Â ¹ÝÀÀÀ» ÀÌ¿ëÇØ¼ ÄÝ·¹½ºÅ×·ÑÀ» Á¤·®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ±×¸®°í Ç÷¾×À» ¿ë¸Å·Î ÃßÃâÇÏ¿© FeCl3 ½Ã¾àÀ» °¡ÇÏ°í ¹ß»ö½ÃÄÑ cholesterol Ester ¿Í Free cholesterolÀ» ±¸ÇÒ¼ö ÀÖ´Ù.
À̹ø ½ÇÇè¿¡´Â standard curve¸¦ ±×¸®Áö ¾Ê°í °£ÆíÇÑ °è»ê¹ý¿¡ ÃøÁ¤°ªµé¸¸ ´ëÀÔÇÏ°Ô µÇ¾î Á¤¸» ½Å¼Ó, °£´ÜÇÏ°Ô ¼öÄ¡°¡ ³ª¿ÔÁö¸¸ ÄÝ·¹½ºÅ×·ÑÀ» ÃøÁ¤ÇÏ´Â ¹ý¿¡´Â ¿©·¯ °¡Áö°¡ ÀÖ°í ¶Ç ±×°¢°¢ÀÇ ¹æ¹ý¿¡ µû¸¥ Àå´ÜÁ¡ÀÌ ºÐ¸íÈ÷ ÀÖÀ¸¹Ç·Î º»ÀÎÀÌ ¸ñÀûÇÏ´Â ¹Ù¿¡ ¸Â°Ô ¹æ¹ýÀ» ¼±ÅÃÇÏ¿© ½ÇÇèÇÏ´Â °ÍÀÌ °¡Àå ÀûÇÕÇÒ °ÍÀÌ´Ù.