DNA 증폭실험

3. 실험시 주의 사항
1) DNA추출시에는 여러 가지방법이 있다. 따라서 실험에 사용하는 대상에 맞는 추출방법을 사용해야 한다.
2) 전기영동시 DNA의 이동속도는 다음과 같은 영향을 받는다.
1> DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
2> Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
3> DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로 빠르게 이동한다.
4> 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
5> 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
6> Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15% 정도 감소시킨다.
7> 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도도 전기영동 속도에 영향을 준다
3) 전기 영동시 주의 사항
* 낮은 전압에서 선형으로 된 DNA 조각의 이동속도는 부하되는 전압에 비례한다. 그러나, 전기장에서 전류의 흐름이 커짐에 따라 높은 분자량을 가진 DNA 조각의 이동속도는 빨라지게 되므로 전압이 올라감에 따라 agarose gel에서 DNA 분리 효과가 감소된다. 2 kb보다 큰 DNA 조각들의 분리를 최대로 하기 위해서는 agarose gel에 5 V/cm 이상의 전 압…(생략)